第四章DNA的复制122讲解学习.pptVIP

第四章 DNA的复制 ;中心法则 (The Central Dogma);核 酸－储存和传递遗传信息蛋白质－ 构成生物体的基本组分, 执行各种生理功能;第一节 DNA复制的方式;一、复制可能的几种方式;密度梯度实验 ;;(semiconservative replication);AGAACTT; 按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA 的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息 ，体现了遗传的保守性。;第二节 复制的原点、方向和方式 ;复制起点(origin) 是DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。细菌染色体、质粒和一些病毒的环形DNA分子通常具有比较明显的复制起点。 E.coli的ori C由两种类型的重复序列组成，一类是3个连续的13 bp序列，其中富含A-T；另一类是反向重复出现4次的9 bp序列。后者对于结合Dna A蛋白以起始DNA复制十分重要。 ;复制起始点（E.coli-oriC）; DNA分子复制时，在亲代双链分子一个特定区域内打开，随之以两股链为模板复制生成两个子代DNA双链分子。开始时，复制起始点呈现一叉形(或Y形)，称之为复制叉(replication fork)。 复制进行中，复制叉向前移动 ; 复制时DNA双链解开分成二股单链?新链沿着张开的二股单链生成，复制中形成的这种 Y 字形的结构称为复制叉;DNA的半不连续续复制 因为DNA双螺旋的两条链是反向平行的，而DNA合成的方向只能是5?→3?，所以在DNA复制时，1条链的合成方向和复制叉的前进方向相同，可以连续复制，这条链叫前导链(1eading strand)；而另一条链的合成方向和复制叉的前进方向正好相反，不能连续复制，只能分成几个片段合成，故称为滞后链(lagging strand)，又称后随链。DNA的这种复制方式是半不连续复制(semidiscontinuous replication)。 因此，复制叉是不对称的。 滞后链片段又叫冈崎片段，它们合成后再连接起来。 ;DNA复制的酶学;DNA 复制的物质基础; 在复制叉处进行复杂的DNA复制过程中，除DNA聚合酶外，需要许多相关的酶和蛋白因子参与：;RNA引物 DNA链不能从头（de novo）合成。在DNA复制开始时必须先合成一小段RNA作为引物(primer)，从它的3’羟基开始合成DNA链，这一过程叫引发(priming)。待DNA链或片段合成结束，再将引物切除。 先导链 后随链; 在研究复制时，将与复制有关的蛋白质命名为： Dna A, Dna B, Dna C,‥‥‥ Dna X;特 性;（一） DNA聚合酶催化的反应;聚合反应的特点：;5’ A G C T T C A G G A T A ? 3’ | | | | | | | | | | |;（二） DNA聚合酶的分类;DNA聚合酶I和DNA聚合酶Ⅱ ;323个氨基酸;;DNA聚合酶Ⅱ是细胞正常生长中一种次要成分，可能与DNA聚合酶Ⅰ类似。;DNA聚合酶Ⅲ;;2、真核生物的DNA聚合酶;真核生物的DNA聚合酶;二、解 链、 解 旋 酶 类;(二) 单链DNA结合蛋白（SSB）;(三）DNA拓扑异构酶;拓扑异构酶作用特点： 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;三、引物酶和引发体;冈崎片段的合成需要经过引发、延伸、引物RNA的去除、缺口填补及切刻连接等步骤;四、DNA连接酶 (DNA ligase); 真核生物和T4噬菌体利用以ATP作为腺苷酰基的供体，而原核生物则以NAD＋为辅因子，催化的反应过程如下： (1)酶的活化 NAD＋或ATP中的腺苷酰基(AMP)与酶活性中心的赖氨酸残基的ε-NH2以磷酰胺键结合，形成共价中间体酶-AMP。 酶 ＋ NAD＋ (ATP)中酶 → AMP- NMN (PPi);(2)腺苷酰化DNA 酶-AMP将腺苷酰基(AMP)转移给DNA切口处的5?磷酰基团，以焦磷酸键的形式活化，形成AMP-P-DNA。 酶- AMP ＋ 5?- P-DNA → 酶十AMP-5?- P-DNA (3)亲核进攻完成DNA连接 通过相邻DNA的3?羟基对活化的磷原子进行亲核进攻，生成3?,5?-磷酸二酯键，同时释放出AMP。 DNA-3?-OH ＋ AMP-5?-P-DNA → AMP ＋ DNA-3?-O-5?-P-DNA; DNA生物合成过程;G1;一、复