动物细胞融合与单克隆抗体讲课 2文档.pptVIP

2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 植物细胞 A 植物细胞 B 去掉细胞壁 去掉细胞壁 原生质体 A 原生质体 B 原生质体融合 杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂 分化发育 愈伤组织 杂种植株 温故知新 : 植物体细胞杂交过程 材料 1: 1970 年，有两位科学家做了一个人 — 鼠细胞融合的实验，以证 明细胞膜的流动性。那么，如何实现人 — 鼠细胞的融合，动物细胞融合 后还有什么用途呢？ 人 - 鼠 ( 想像图 ) 一、动物细胞融合 1. 概念： 动物细胞融合（ cell fusion ）也成细胞杂 交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细 胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传 物质的单核细胞，称为 杂交细胞 。 2 、原理： 细 胞膜的流动性 3. 融合过程： 诱导融合的方法？ 诱导方法： 物理方法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇（ PEG) 为什么灭活的 病毒能作诱导剂？ 3. 融合过程： 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 使用的酶 诱导方法 主要用途 细胞膜的流动性 细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （ 离心、振荡、电激） 化学方法（ PEG ） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 使细胞分散后 诱导细胞融合 4. 意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂 交（种间、属间、科间、动植物之间）成 为可能。 5. 应用： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 动物细胞融合 物理法： 化学法： 生物法： 诱导融合的方法 原理： 细胞膜的流动性 过程： 离心、震动、电激 聚乙二醇（ PEG) 灭活的病毒 动、植物细胞融合的主要区别 用途： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？ 如何产生 ？ 2. 抗体 的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体 ？ 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？ 如何产生 ？ 2. 抗体 的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体 ？ 抗体的传统生产方法 从 血 清 中 分 离 抗 体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗 体的特异性差、灵敏度低。 多 种 效 应 B 细 胞 动 物 体 内 多 种 抗 体 抗 原 单克隆抗体的制备 ? 单克隆抗体 : 单个细胞克隆产生的化学 性 质单一特异性强的抗体 ? 利用效应 B 细胞产生抗体的功能 ? 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 ? 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂 交瘤细胞 ? 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 设计方案： 1 、过程 注射抗原 已免疫的 B 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、 筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选 ，继续培养 足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 单克隆抗体的制备 骨髓瘤细胞 免疫小鼠 单克隆抗体 筛选 克隆、 筛选 体内培养 体外培养 B 淋巴细胞 （选择培养基） （抗体检测） 细胞融合 杂交细胞 1 、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2 、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第 1 次筛选要淘汰哪些细胞？ 3 、杂交瘤细胞有何特点？ 4 、本过程利用的哪些技术？ 思考以下问题： 2 、 单克隆抗体的优点 特异性强、灵敏度高 3 、 单克隆抗体的应用 （ 1 ）作为诊断试剂 —— 最广泛应用 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记 单克隆抗体，可 诊断肿瘤、心血 管畸形等） （ 2 ）运载药物 生物导弹 = 单克隆抗体 + 药物，治疗肿瘤） (“ 生物导弹”