荧光寿命的认识 课件.pptVIP

荧光寿命 (fluorescence lifetime) 当某种物质被一束激光激发后，该物质的分 子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态上，再以 辐射跃迁的形式发出荧光回到基态。当去掉激发 光后，分子的荧光强度降到激发时的荧光最大强 度 I 0 的 1/e 所需要的时间，称为荧光寿命，常用 ? 表 示。如荧光强度的衰减符合指数衰减的规律 : I t ? I 0 e -kt 其中 I 0 是激发时最大荧光强度， I t 是时间 t 时的 荧光强度， k 是衰减常数。假定在时间 ? 时测得的 I t 为 I 0 的 1/e ，则 ? 是我们定义的荧光寿命。 1 ppt 课件 寿命 ? 是衰减常数 k 的倒数。事实上，在瞬间激发后的某个 时间，荧光强度达到最大值，然后荧光强度将按指数规律 下降。从最大荧光强度值后任一强度值下降到其 1/e 所需 的时间都应等于 ? 。 2 ppt 课件 如果激发态分子只以发射荧光的方式丢失能量， 则荧光寿命与荧光发射速率的衰减常数成反比，荧光发 射速率即为单位时间中发射的光子数，因此有 ? F ? 1/K F 。 K F 是发射速率衰减常数。 ? F 表示荧光分子的固有荧光寿命， k F 表示荧光发射 速率的衰减常数。 3 ppt 课件 处于激发态的分子，除了通过发射荧光回到基态以外， 还会通过一些其它过程 ( 如淬灭和能量转移 ) 回到基态，其 结果是加快了激发态分子回到基态的过程 ( 或称退激过程 ) ，结果是荧光寿命降低。 寿命 ? 和这些过程的速率常数有关，总的退激过程的速率 常数 k 可以用各种退激过程的速率常数之和来表示 : k ? k F + ? k i k i 表示各种非辐射过程的衰减速率常数。 则总的寿命 ? 为 : ? ? 1/k ? 1/(k F + ? k i ) 4 ppt 课件 由于吸收几率与发射几率有关， ? F 与摩尔消光系数 ? max ( 单位为 cm 2 mol -1 或 (mol ? dm -3 ) -1 cm -1 ) 也密切相关。 从下式可以得到 ? F 的粗略估计值 ( 单位为秒 ) 。 1/ ? F ≈10 4 ? max 在讨论寿命时，必须注意不要把寿命与跃迁时间混 淆起来。跃迁时间是跃迁频率的倒数，而寿命是指分 子在某种特定状态下存在的时间。 通过量测寿命，可以得到有关分子结构和动力学方 面的信息。 5 ppt 课件 ? 荧光寿命及其含义 ? （ 1 ）假定一个无限窄的脉冲光 ( δ 函数 ) 激发 n 0 个荧 光分子到其激发态 , 处于激发态的分子将通过辐射 或非辐射跃迁返回基态。假定两种衰减跃迁速率分 别为 Γ 和 knr, 则激发态衰减速率可表示为 dn(t)/dt=- (Γ+ knr) n(t) (1) ? 其中 n(t) 表示时间 t 时激发态分子的数目 , 由此可得 到激发态物种的单指数衰减方程。 n(t) = n 0 exp(- t/τ) (2) 6 ppt 课件 ? 式中 τ 为荧光寿命。荧光强度正比于衰减的激发态分子 数 , 因此可将上式改写为 : ? I(t) = I 0 exp(- t/τ) (3) 其中 I 0 是时间为零时的荧光强度。 ? 于是 , 荧光寿命定义为衰减总速率的倒数 : ? τ = (Γ+ knr) - 1 (4) ? 也就是说荧光强度衰减到初始强度的 1/e 时所需要的时 间就是该荧光物种在测定条件下的荧光寿命。实际上 用荧光强度的对数对时间作图 , 直线斜率即为荧光寿命 倒数的负值。荧光寿命也可以理解为荧光物种在激发 态的统计平均停留时间。 7 ppt 课件 ? 事实上当荧光物质被激发后有些激发态分子立即返 回基态 , 有的甚至可以延迟到 5 倍于荧光寿命时才返 回基态 , 这样就形成了实验测定的荧光强度衰减曲 线。由于实际体系的复杂性 , 荧光衰减往往要用多 指数或非指数衰减方程描述 : ? I(t) = ∑α i exp(- t/τ i ) (5) ? 式中 α i 为第 i 项的指前因子。衰减方程的复杂性反 映了体系中荧光物种的多样性或存在状态的复杂性。 8 ppt 课件 9 ppt 课件 ? 图中有三条曲线 , 分别是实际测定强度衰减曲线 N(t k ) 、仪器响应函数 L(t k ) 和拟合函数 N c (t k ) 。 ? 仪器响应函数也被称之为光源函数 , 实际工作中 以胶体 SiO 2 为虚拟样品进行测定 ,