6.3紫外可见分光.pdf

紫外-可见分光光度法 光是电磁波，不同波长的光具有不同的能量。波长200～400nm 为紫外光区，400～760nm 为可见光区。物质吸收紫外和可见光区的电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。 利用紫外-可见吸收光谱进行定性和定量分析的方法，称为紫外-可见分光光度法。紫外-可见 分光光度法可用于药物的鉴别、检查和含量测定，是药品检验中应用非常广泛的一类仪器分 析方法。 一、基本原理 分子的价电子吸收了光的能量，由低能量的基态转变为高能量的激发态的过程称为跃 迁。产生跃迁的必要条件是光子所提供的能量正好与跃迁所需的能量相当，紫外光和可见光 所具有的能量，恰好能满足电子在不同电子能级之间的跃迁。不同结构的物质分子能级差不 同，可以产生不同的紫外-可见吸收光谱，据此可以对物质进行定性分析。 分子对特定波长光的吸收程度除了与分子的结构有关外，还与被测物质溶液的浓度有 关。单色光穿过吸光物质溶液时，在一定的浓度范围内，被该物质吸收的光量与该物质溶液 的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比。其关系式如下： I A=-lg lg T E ·C·L I 0 式中，A 为吸光度，T 为透光率，E 为吸收系数，C 为被测物质溶液的浓度，L 为液层厚度。 吸收系数E 是物质的物理常数，随浓度C 单位的不同，吸收系数E 有不同的意义和表 示方法。当C 以“mol/L ”为单位时，E 称为摩尔吸收系数，用表示；当C 用“g/100ml ” 为单位时，E 称为比吸收系数，用E 1% 表示。在药品检验中使用比吸收系数（E 1% ），简称 1cm 1cm 吸收系数，其物理意义是当吸光物质溶液浓度为1％（1g ／100ml），液层厚度为1cm 时，在 一定条件（波长、溶剂、温度）下的吸光度。 从上式可知，在一定条件下，吸光度（A ）与溶液浓度（C）和光路长度（L ）成正比， 这是紫外-可见分光光度法用于药物定量测定的根据。 二、紫外-可见分光光度计 （一）仪器的基本结构 用于紫外-可见分光光度法分析的仪器为紫外-可见分光光度计。紫外-可见分光光度计的 基本结构如图所示。 紫外-可见分光光度计结构的示意图 1.光源 光源的作用是提供一定强度、稳定且具有连续光谱的光。紫外光区通常采用氢 灯或氘灯，可见光区采用钨灯或卤钨灯。 2.单色器 单色器的作用是将来自于光源的复合光色散成按一定波长顺序排列的连续 光谱，并从中分离出一定宽度的谱带。色散元件是单色器最重要的组成部分，早期的色散元 件主要是棱镜，近年来由于光栅可方便地得到高质量的、分布均匀的连续光谱而被广泛采用。 狭缝是单色器的又一重要部件。狭缝的宽度直接影响到单色光的谱带宽度，宽度过大， 单色光的纯度差，宽度过小，光强度减小，检测灵敏度降低。 3.吸收池 吸收池又称比色皿，用于盛装样品溶液或空白溶液，以进行测定。吸收池应 选择在测定波长范围内没有吸收的材质制成。玻璃能吸收紫外光，所以玻璃吸收池不适用于 紫外光区的测定，仅适用于370nm 以上的可见光区；石英吸收池既适用于紫外光区的测定， 也适用于可见光区，但由于价格较贵，通常仅在紫外光区使用。 4.检测器 常用的检测器有光电池、光电管或光电倍增管等。它们都可将接受的光信号 转变为成比例的电信号，信号再经过处理和记录就可以得到紫外吸收光谱或吸光度的测定值 了。 （二）仪器的校正和检定 1.波长 为保证测定结果的准确性，《中国药典》规定，除定期对仪器进行全面校正和 检定外，还应于测定前对波长进行校正。这是由于温度变化对机械部分的影响，使仪器的波 长经常会有所变动。常以汞灯中的几根较强的谱线或用仪器中氘灯的特定谱线为参照进行校 正；钬玻璃因其在特定的波长有尖锐的吸收，也可做波长校正使用，但需注意，不同来源的 钬玻璃可能有微小的差异。 2.吸光度的准确度 吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液来检定。取在120℃