11.3生物制品分析-电泳与酶法.pdf

生物制品分析方法 生物制品分析的常用方法 由于生物制品与化学药、中药在理化特性等方面的差异，其分析方法也与它 们有较大不同。这里对生物制品分析常用的方法进行简单的介绍。 微生物在药学中的应用 一、电泳法（electrophoresis ） 二、酶法（enzymatic assay ） 三、免疫分析法(immunoassay ，IA) 一、电泳法（electrophoresis） 定义：所谓电泳就是带电粒子或离子在电场作用下的 定向移动，依据带电粒子在电场的作用下迁移行为的不同 微生物在药学中的应用 进行分离的技术称为电泳。 区带电泳：它是样品在惰性支持物上进行电泳，被分 离成不同区带，从而达到分离分析的目的。因电泳后，样 品的不同组分形成带状区间，故称区带电泳。 常用电泳方法 原理 优点 用途 琼脂糖凝胶电泳 蛋白质的带电性质 简单、方便 DNA等的分离 1.蛋白质的带电性质 1.分辨力高，重复性好 聚丙烯酰胺凝胶 2.对pH和温度变化较稳定 微生物在药学中的应用 蛋白质的分离和制备 2.分子筛作用 电泳（PAGE ） ，没有吸附和电渗作用 3.凝胶的浓缩作用 3. 操作中不污染样品 1.蛋白质的带电性质 2.分子筛作用 电泳迁移率只与蛋 用于生物制品的纯度检 SDS.凝胶的浓缩作用 查，也可用来测定蛋白 4.SDS掩盖蛋白质不 白质的分子量相关 质的分子量 同的带电性质 1.分辨率高、重复性好 2.操作简便、迅速 等电聚焦电泳 蛋白质等电点的性质 3.分离仅仅决定于蛋白质 的等电点 二、酶法（enzymatic assay） 常用的酶法有以下两种 1 ）酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析 目的在于测定酶的活力单位 2 ）酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 目的在于测定其他物质的含量 （一）酶活力测定法 酶活力测定法中酶活力是指：酶催化一定反应的能力。酶活力的测定是测定一 个被酶催化反应的反应速度。 1个酶活力单位是指在特定条件（25℃ ，其它为最适条件）下，在1分钟内能转 化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。 常用测定方法： 1 ）取样测定法：测定底物减少量或产物的增加量 2 ）连续测定法：直接连续测定反应系统的方法。 （一）酶活力测定法 由于酶活力受多种因素的影响，因此酶活力测定时，选择反应条件的基本要求 是反应系统中待测定的酶浓度是影响反