雌激素通过GPER介导RIRI大鼠肾脏保护作用的研究.pdfVIP

摘 要 目的：探究G 蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor, GPER)在雌激素抑制氧化应激 反应，减轻大鼠肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfudion injury, RIRI ）过程中的作用及可能机制。 方法：（1）选择雌性SD 大鼠40 只，所有大鼠行去卵巢（OVX ）处理，恢复2 周后随机分为五组（8 只/组），分别为：去卵巢后不作处理的去卵巢组（OVX 组），去卵巢后行肾缺血再灌注损伤模型的缺 血再灌注损伤组（OVX+I/R 组），I/R 损伤模型前给予雌激素干预的雌激素干预组(OVX +I/R+E2 组) ， I/R 损伤模型前给予GPER 特异性激动剂G1 干预的G1 干预组(OVX +I/R+G1 组) ，I/R 损伤模型前给 予GPER 特异性阻断剂G15 干预后再予E 干预的G15+雌激素干预组(OVX+I/R+E +G15 组) 。OVX 2 2 组：OVX 术后不给予处理，常规饲养。OVX +I/R 组：将大鼠右侧肾脏完整切除，使用无损伤血管 夹完全夹闭左侧肾蒂45 分钟后松开血管夹，制备I/R 模型。OVX +I/R+E2 组：在I/R 造模开始的 1 小时前给予E2 （100 ug/kg）皮下注射一次，剩余步骤参考OVX+I/R 组造模方法。OVX +I/R+G1 组： 在I/R 造模开始的 1 小时前给予G1 （100 ug/kg）腹腔注射一次，剩余步骤参考OVX+I/R 组造模方 法。OVX+I/R+ E +G15 组：在I/R 造模开始的 1.5 小时前给予G15 （300 ug/kg ）腹腔注射一次，造 2 模前 30 分钟给予E (100ug/kg)皮下注射一次，随后参考 OVX+I/R 组造模方法进行缺血再灌注模型 2 制备。各组大鼠完成以上操作后正常饲养24 小时，行腹主动脉采血后取出左侧肾脏。（2 ）检测血清 肌酐（Cr ）和尿素氮（BUN ）水平。（3 ）通过苏木素-伊红（HE ）染色观察各组大鼠肾脏损伤情况并 进行Paller 评分。（4 ）应用SOD 试剂盒及MDA 试剂盒进行肾组织SOD 活性及MDA 含量的检测。 （5 ）应用Western-blot 检测各组肾脏组织p-PI3K/PI3K 、p-Akt/Akt 蛋白表达。 结果：（1）与OVX 组相比，OVX+I/R 组大鼠BUN 和Cr 水平明显升高；与OVX+I/R 组相比，E2 干 预组与G1 干预组Cr 和BUN 水平明显下降；与E 干预组相比，E +G15 干预组Cr 和BUN 水平明 2 2 显升高。（2 ）HE 染色结果：OVX 组肾小球、肾小管结构正常，间质无充血水肿，无炎性细胞浸润； OVX+I/R 组肾小管则明显扩张，细胞有不同程度的肿胀甚至坏死以及脱落，肾间质水肿，炎性细胞 浸润明显；E2 组和G1 组大鼠肾小管轻度扩张，上皮细胞肿胀较轻微，坏死较少，炎性细胞浸润程度 明显减轻；E +G15 组肾小管结构不清，部分上皮细胞出现坏死以及脱落。Paller 评分结果：与OVX 2 相比，OVX+I/R 组肾组织损伤严重；与OVX+I/R 组相比，E2 和G1 干预后肾脏损伤减轻；与E2 组 相比，E +G15 组肾脏损伤严重。（3 ）肾组织氧化应激指标：与OVX 组相比，IR 组大鼠肾组织SOD 2 活性显著降低，MDA 含量明显升高；与 IR 组相比，E2 和G1 干预组大鼠肾组织 SOD 活性显著升 高，MDA 含量明显下降；而E +G15 组肾组织SOD 活性较E 组降低，MDA 含量较E 组明显上升。 2 2 2 （4 ）WesternBlot 结果：与OVX 组相比，I/R 组肾组织中p-PI3K 和p-Akt 的表达明显降低；