第四章诱变剂.pptVIP

3. 烷化剂的作用机制 烷化剂主要是通过烷化基 团 使 DNA 分子上的碱基 及磷酸部分被烷化 ， DNA 复制时导致碱基配 对错误而引起突变。 碱基中容易发生烷化的位 点。 G-N 7 、 G-O 6 、 T-O 4 。 3.1 作用位点 （ 1 ）对碱基的烷化作用 3.2 作用方式 （ 2 ）引起 DNA 双链间的交联 4. 烷化剂的性质 烷化剂的性质比较活泼，在水溶液中容易发生水解。它们 大部分半衰期很短（与温度、溶液 pH 关系很大）。 烷化剂杀菌率低而诱变效应高； 极毒！ 能致癌。 操作中应有防护措施，且 小心谨慎！！！！避免接触身体及 污染环境。 5. 几种常用烷化剂 5.1 亚硝基胍（全称： 1- 甲基 -3 硝基 -1- 亚硝基胍 NTG ） 性质： ①黄色结晶，不溶于水，见光易分解。 ②有 超诱变剂 之称。能使细胞发生一次或多次突 变。还能使多基因并发突变。 ③诱变适合 pH 值为 6.0 。 诱变处理方法： ①菌体用缓冲液洗下制成 菌悬液 ，离心，洗涤（浓度 10 6 ～ 10 7 ml -1 ） ②配制 NTG 母液 ：配成 1mg/ml （比例： NTG 丙酮溶液 1ml: 缓冲液 9ml ）。使用时取母液 0.2ml ，加菌悬液 1.8ml 。 ③诱变处理：参考菌种和终浓度要求，将 NTG 加入菌悬液， 保温 一定时间（细菌 20 ～ 60min ）。 ④终止反应：用冷生理盐水 稀释 50 倍 以上。 ⑤后处理：低温 离心洗涤 除去药液，加无菌水悬浮并做成 一定稀释度 分离于平皿 。或 按一定浓度加后培养基于菌体 沉淀物中，振荡培养 1.5 ～ 2h 再稀释分离。 凡接触 NTG 的器皿必须及时、单独处理。 5.2 甲基璜酸乙脂（又称乙基硫酸甲烷 EMS ） 性质：①无色液体难溶于水，不稳定，易水解挥发。 ②最佳诱变 pH:7.0~7.4 诱变处理方法 : ①配制 0.5mol/L EMS 母液：预冷所需器皿，取 10mol/L EMS 原液 0.5ml 加入 9.5ml pH 7.2 的磷酸缓冲液中，加盖封口。 ②制备菌悬液：培养菌体至对数期，离心洗涤，用缓冲液制 成 8ml 菌悬液（ 10 7 ～ 10 8 ml -1 ；孢子为 10 6 ～ 10 7 ml -1 ）。 ③ 诱变：取 EMS 母液 2ml 加入以上 8ml 菌悬液中（终浓度 为 0.1 mol/L ；孢子为 0.2 ～ 0.5 mol/L ），处理一定时间（根 据预实验结果确定）。 终止反应： 用 50 倍生理盐水稀释或加入 2 ％ Na 2 S 2 O 3 ，多次 离心洗涤。 第四章 诱变剂 凡能诱发生物基因发生突变且突变率远远超过 自发突变率的物理因子和生物化学物质统称为诱 变剂。 包括： 物理诱变剂；化学诱变剂；生物诱变剂 诱变剂 第一节 物理诱变剂 第二节 化学诱变剂 第三节 生物诱变剂 主要内容 第一节 物理诱变剂 物理诱变剂指物理辐射中的各种射线，包括紫外线、 x 射线、γ射线、快中子、α射线、β射线、微波、 超声波、电磁波、激光等。 诱变中常用的是紫外线（ uv ）、 x 射线、 γ射线、 快中子。 物理辐射可分为 电离辐射 （ ionizing radiation ）、 非 电离辐射 （ nonionizing radiation ）。 单位：量子。 种类 性质 产生体 波长 效果 x 射线 高能电磁波 x 光机 0.06-136nm 产生正离子 γ射线 高能电磁波 钴、镭 0.006-1.4nm 产生正离子 快中子 中子 钚 -239 撞出质子 紫外线 光 紫外灯 136-390nm 使内层电子级能提高 一、物理诱变剂的生物学效应 物理诱变剂对微生物的诱变作用主要是由 高能辐射 引起 生 物系统损伤 ，继而发生 遗传变异 的一系列复杂的连锁反应 过程。 作用过程可分为物理、物理 - 化学、化学、生物学等几个阶 段。 辐射引起生物学效应的影响因素 ⑴ 微生物的遗传背景 ⑵ 微生物的生理状态 ⑶ 可见光 ⑷ 水分 ⑸ 温度 ⑹ 空气或氧气 二、非电离辐射 —— 紫外线 1. 紫外线的诱变机制 形成嘧啶二聚体 2.DNA 损伤修复 ⑴光修复 ⑵切补修复 （一）紫外线的诱变机制和 DNA 损伤修复 （二）紫外线诱变 1 、紫外线的有效光谱 能诱发微生物突变的紫外线的有效波长范围是 200 ～ 300nm ，最有效的波长为 253.7nm 。 2 、紫外线的辐射剂量 有绝对剂量和相对剂量之分。 绝对剂量：单位 erg/mm 2 （ 1erg=10 -7 J ） 用 剂量仪 测 定 相对剂量：单位用 照射时间 或 杀菌率 表示。 剂量决定于紫外灯功率、灯管与照射物的距离及照射 时间。 15W 紫外灯