10感染性疾病的诊断.ppt

10感染性疾病的诊断; 分子诊断的临床意义在于不仅能够对疾病作出早期诊断、确切诊断，而且还能确定个体归于疾病的易感性以及疾病的分期分型、疗效监测、预后判断等。随着分子诊断学的发展，分子诊断的原理和方法不仅适用于遗传性疾病，而且也广泛应用于感染性疾病、肿瘤等医学领域。 从生物中心法则来看，分子诊断包括检测基因的结构异常和基因表达异常。常见的分子诊断方法如下： ;DNA;第十四章感染性疾病的分子诊断;第一节 概 述;常规检测方法： 免疫学方法 微生物学方法 受敏感性、特异性限制，不易早期诊断，并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信息。;分子生物学方法： 聚合酶链式反应（PCR） 核酸杂交 基因芯片 早期、特异地进行诊断，能提供病原体分型及耐药性方面的信息，同时进行大量基因的检测。;10感染性疾病的诊断;1. 一般性检出策略和方法;2. 完整检出策略和方法;10感染性疾病的诊断;分支链DNA信号放大技术(bDNA);nucleic acid sequence-based amplification (NASBA);;;10感染性疾病的诊断;10感染性疾病的诊断;3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相关信息 临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样本中仍可以检测出相应的病原体。 有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。 4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不能说此病原体就是引起疾病的直接原因。 该病原体可能是一种正常菌群 ;10感染性疾病的诊断;第二节 病毒的基因检测; 我国是HBV高流行区，50%－70%的人受过感染，8%－10%是HBV携带者，肝炎患者中60%是慢性肝炎患者，导致肝硬变，HBV又与原发性肝癌密切相关。 外壳（HBsAg): 外壳蛋白成分为表面抗原 核心（HBcAg)： DNA DNA 聚合酶 HBcAg;Dane颗粒（完整的病毒）形态;（一）病毒基因组结构;pre-s1 ;（二）分子诊断;扩增位置 引物序列 扩增片断（bp) P、X基因 5’-ATACTGCGGAACTCCTAGC-3’ 278 5’-CCGCGTAAAGAGAGGTGCG-3’ C基因 5’-ATACCACAGAGTCTAGACTCGTGGTGGACT-3’ 477 5’-AAGCCCTACGAACCACTGAACAAATGGCAC-3’ C基因 5’-GCTTTGGGGCATGGACATTGACCCCTATAA-3’ 258 5’-ATGGGATCCCTGGAATGCGGGTCTTCCAAA-3’ ; 有时为了证实扩增产物的特异性，对扩增产物进行以下分析： RLFP 斑点杂交 Southern杂交 ;2. 支链DNA信号放大技术(bDNA）;捕获探针固化在微孔板上 靶探针1分别与捕获探针及待测核酸杂交 靶探针2分别与待测核酸及bDNA杂交 形成复合物：;分支链DNA信号放大技术(bDNA);信号检测：bDNA可结合很多酶标探针，酶催化底物（1,2-二恶二酮，dioxetane）发光，使核酸信号放大，且发光强度与DNA量成正比。 优点：放大倍数确定 阳性检出率高 稳定性和可重复性好 操作简便，省时，易于普及;支链DNA技术;3.基因芯片技术 标本经PCR扩增后与芯片上的特异探针进行杂交，可以检测： 是否有病毒感染 感染病毒的种类及亚型 病毒的耐药情况 特点：可同时进行大量标本的检测;近年来陆续上市的核苷(酸)类似物对HBV的治疗压力集中在P区。;（三）临床意义;2.监测治疗效果: HBVDNA107拷贝/ml提示病毒复制活跃； HBVDNA＜104拷贝/ml治疗有一定疗效； HBVDNA＜103拷贝/ml、HBeAg阴转、转氨酶正常为乙型肝炎临床治愈指标； 3.判断病情，指导制定合理的治疗方案; 4.病毒耐药性的检测 乙肝病毒DNA聚合酶YMDD处的突变是病毒产生耐药性的重要原因，通过监测YMD