成年神经发生在苯并[a]芘暴露损害小鼠记忆功能中的作用机制研究.pdf

山西医科大学硕士学位论文 目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表 VIII 前 言 1 第一部分 苯并[a]芘暴露对小鼠记忆相关行为的影响 3 1 材料与方法 3 1.1 实验动物 3 1.2 主要仪器和试剂 3 1.3 动物染毒与分组4 1.4 行为学测试 5 1.5 统计分析 8 2 结 果9 2.1 新事物识别实验9 2.2 Morris 水迷宫实验 10 2.3 条件性恐惧记忆测试和开放旷场实验 12 3 讨 论 14 4 结 论 16 第二部分 苯并[a]芘暴露对小鼠海马成年神经发生的影响 17 1 材料与方法 17 1.1 实验动物 17 1.2 主要仪器和试剂 17 1.3 所用抗体 19 1.4 动物染毒与分组20 1.5 免疫组织化学20 1.6 统计分析21 2 结 果22 山西医科大学硕士学位论文 2.1 注射结束后1 周苯并[a]芘对小鼠海马DG 区成年神经发生的影响22 2.2 注射结束后3 周苯并[a]芘对小鼠海马DG 区成年神经发生的影响24 3 讨 论26 4 结 论28 第三部分 苯并[a]芘暴露对小鼠海马Wnt/-catenin 信号通路的影响29 1 材料与方法29 1.1 实验动物29 1.2 主要仪器和试剂29 1.3 所用抗体 31 1.4 动物染毒与分组 31 1.5 免疫蛋白印迹 31 1.6 统计分析 34 2 结 果 35 苯并[a]芘暴露对小鼠海马Wnt/-catenin 信号通路的影响 35 3 讨 论 37 4 结 论 39 参考文献40 综 述44 致 谢 54 攻读硕士期间研究成果与学术交流 56 山西医科大学硕士学位论文 成年神经发生在苯并[a]芘暴露损害小鼠记忆功能中的作用机 制研究 摘 要 目的： 研究苯并[a]芘暴露对小鼠学习记忆、恐惧记忆等行为的影响，以及其对大脑海 马齿状回区成年神经发生的影响，并进一步探索Wnt/-catenin 信号通路是否参与相 关的改变的调控。 方法： 选取健康8周龄C57BL/6雄性小鼠198只，随机分为3组：染毒组、溶剂对照组和 生理盐水对照组。各组每天分别腹腔注射0.04%苯并[a]芘溶液 （2mg/kg ）、等体积橄 榄油（5mL/kg ）和等体积生理盐水（5mL/kg ）连续10天，之后各组每天均腹腔注射 1%BrdU溶液（100mg/kg）连续5天。在注射结束后的第1周和第3周各取8只分别进行 新事物识别实验、Morris水迷宫实验、条件性恐惧记忆测试和开放旷场测试，以此检 测苯并[a]芘暴露对小鼠新事物识别记忆、视觉空间记忆和条件性恐惧记忆功能的影响； 每组另各取6只灌注后取材进行冰冻切片，通过免疫荧光染色的方法观察并计数海马 齿状回区DCX/NeuN与BrdU 的双阳性神经元的数量，并以此观察苯并[a]芘暴露对小鼠 成年神经发生的影响。注射结束后1周，每组另各取6只取材做Western Blot ，检测苯 并[a]芘暴露对Wnt/-catenin信号通路关键蛋白-catenin和Axin2 表达的影响，观察 Wnt/-catenin信号通路是否参与调控成年神经发生并产生以上改变。采用GraphPad Prism 7和SPSS 21.0对数据进行绘图处理和统计学分析。实验数据以均数±标准误 （Mean±SEM ）表示。多组之间经正态性和方差齐性检验后使用One-