白念珠菌SAP2及其酶抑制剂利托那韦在唑类药物耐药中的作用.pdf

目 录 中文摘要 Ⅰ 英文摘要 Ⅲ 英文缩略词表Ⅵ 前言1 第一部分 Saps酶抑制剂利托那韦对白念珠菌Saps活性的影响3 1 材料与方法3 1.1 菌株 3 1.2 主要试剂、仪器及设备3 1.3 实验方法4 1.4 结果判读4 1.5 统计学分析4 2 结 果6 3 讨 论7 第二部分 利托那韦联合氟康唑对白念珠菌体外药物敏感性试验8 1 材料与方法8 1.1 菌株8 1.2 主要试剂、仪器及设备8 1.3 实验方法9 1.4 结果判读11 1.5 统计学分析11 2 结 果13 3 讨 论16 第三部分 白念珠菌SAP2 、ER G11 基因突变/高表达在唑类药物耐药中的作用18 1 材料与方法18 1.1 菌株18 1.2 主要试剂、仪器及设备18 1.3 实验方法19 1.4 统计学方法20 2 结 果21 2.1 SAP2/ERG11测序21 2.2 SAP2/ERG11基因相对表达量检测25 3 讨 论30 3.1 SAP2 基因突变/高表达在唑类耐药中的作用30 3.2 ERG11基因突变/高表达在唑类耐药中的作用30 结论34 参考文献35 综 述37 致 谢44 个人简历46 山西医科大学硕士学位论文 白念珠菌SAP2及其酶抑制剂利托那韦在唑类药物耐药中的作用 中文摘要 目的： 1 Saps RIT Saps 、探讨 酶抑制剂利托那韦 （ ）对白念珠菌毒力因子 活性的影响。 2、探讨利托那韦联合唑类药物氟康唑 （FCA）对游离状态及生物膜状态下白念珠菌 的体外药物敏感性。 3、探讨白念珠菌毒力因子SAP2、靶酶基因ERG11突变高表达与唑类药物耐药的关/ 系。 方法： 1 50 、选取山西医科大学第二医院皮肤病性病科真菌实验室已鉴定的白念珠菌 株，在 含有不同浓度利托那韦的BSA 培养基中检测毒力因子Saps 的活性，探究利托那韦是 否影响白念珠菌毒力因子Saps 的活性，进而影响白念珠菌的毒力致病。 2 Clinical Laboratory and Standards Institute 、采用美国临床实验室标准化研究所 （ ， CLSI）推荐的M27-A4 微量稀释法对临床白念珠菌株进行利托那韦联合FCA 体外药 敏试验，探究游离状态和生物膜状态下，利托那韦联合FCA 作用于白念珠菌是否会 产生增敏效应。 3、提取白念珠菌毒力因子SAP2、靶酶基因ERG11基因组DNA 并测序，寻找突变位 点，并通过RT-PCR检测二者的mRNA表达水平，探讨毒力因子SAP2、靶酶基因ERG11 突变高表达与白念珠菌唑类药物耐药的关系。/ 结果： 1 RIT Saps RIT 2µg/mL 0.697 0.093 、 对白念珠菌毒力因子 活性的影响： 浓度为 （ ± ）、 8µg/mL （0.800±0.075）、32µg/mL （0.856±0.08）时，白念珠菌SAP2 活性均低于空 白对照组 （0.631±0.083），差异有统计学意义，F 74.06，P0.05。 2、RIT 联合FCA 体外药敏试验结果：游离状态下，联合RIT 后FCA 的MIC50 中位 4µg/mL 2µg/mL