hnRNP E2与宫颈癌变的关系及其结合基因的功能分析.pdf

目 录 中文摘要I AbstractV 前 言1 1 材料与方法4 第一部分 人群研究4 1.1 研究对象4 1.2 资料和标本收集4 1.3 所需仪器及试剂5 1.4 实验方法7 第二部分 体外实验研究9 1.5 细胞系的选择9 1.6 主要实验仪器与试剂9 1.7 实验方法10 1.8 数据整理与分析14 1.9 质量控制14 2 结 果16 第一部分 人群研究16 2.1 一般人口学特征及宫颈癌变相关因素分析16 2.2hnRNPE2 与HPV16在宫颈癌变中的作用及其相互关系17 第二部分 hnRNPE2 与Siha细胞基因组的结合和功能分析20 2.3 测序基本信息统计20 2.4 基因组测序深度累积分布21 2.5hnRNPE2 结合位点分析22 2.6hnRNPE2 结合的基因在染色体上的分布25 2.7hnRNPE2 结合基因的GO功能和Pathway 分析26 3 讨 论34 3.1hnRNPE2 与HPV16在宫颈癌变中的作用及其相互关系34 3.2hnRNPE2 结合位点的分布特征和序列特征36 3.3hnRNPE2 结合基因的分布特征36 3.4hnRNPE2 结合基因的功能和通路分析38 全文小结41 创新与不足42 参考文献43 综 述52 致 谢61 个人简历62 山西医科大学硕士学位论文 hnRNPE2 与宫颈癌变的关系及其结合基因的功能分析 摘 要 目的： HPV 反复或持续感染是宫颈癌变发生主要但并非唯一的病理因素，寻找其他致 癌因子或协同HPV 的致癌因素成为目前关注的焦点。核不均一核糖核蛋白E2（hnRNP E2）是存在于细胞核中的一种RNA 结合蛋白，其含有的独特KH 域具有DNA 和RNA 的结合位点，为其实现细胞信号转导、基因转录调节、控制mRNA 的稳定和翻译等 一系列生物学功能提供了前提条件。研究表明，hnRNPE2 在众多肿瘤中存在异常高 表达，但在宫颈癌变中的表达情况尚无定论。hnRNPE2 可以与DNA 发生结合，但 其在HPV16 阳性的Siha 细胞中与全基因组DNA 的结合尚不明确。此次研究选取不 同宫颈病变患者，检测hnRNPE2 蛋白表达水平，同时检测HPV16 感染情况，探讨 hnRNPE2 与HPV16在宫颈癌变中的作用及其相互关系；进一步在体外细胞实验中， 选择HPV16 阳性的Siha细胞为实验媒介，应用ChIP-Seq 技术，分析hnRNPE2 与全 基因组的结合位点以及结合的基因，全面地揭示hnRNPE2 结合位点和基因的分布特 征，以及对hnRNPE2 结合基因进行GO 功能分类，对靶基因可能参与的生物信号通 路进行预测，从而为宫颈癌病因学和机制的深入研究提供新的依据，为寻找宫颈癌防 治的生物靶点开拓新的思路。 方法： 本次研究对象全部来源于课题组在山西省介休市建立的 “自然人群宫颈病变队 列”，选取2014 年6 月-9 月经宫颈液基薄层细胞学检测 （TCT）、阴道镜检查，排 除信息缺失和未完全完成体格检查者，最终病理学确诊的正常宫颈（NC）妇女67 名、 低度宫颈上皮内瘤样变 （CIN Ⅰ）患者69例、高度宫颈上皮内瘤样变 （CIN Ⅱ/Ⅲ）患 者68例，以及同期在山西医科大学第二医院经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌 （SCC） 患者53例。采用结构式问卷收集宫颈癌变相关资料，并采集宫颈脱落细胞和宫颈活 检组织。采用导流杂交法检测HPV16 感染情况，WesternBlot 检测hnRNPE2 蛋白表 I 山西医科大学硕士学位论文 达水平。利用SPSS21.0 软件进行相关数据的Logistic 回归分析、Kruskal-WallisH 检 2 2