H2O2干预对不同来源间充质干细胞活性氧水平的影响.pdf

山西医科大学硕士学位论文 目 录 中文摘要 7 英文摘要 9 常用缩写词中英文对照表 12 前言 13 第一部分 hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 的分离、培养、鉴定 14 1 材料与方法 15 1.1 实验材料 15 1.2 仪器及耗材 15 1.3 实验试剂 16 1.4 实验方法 16 1.5hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 的鉴定 17 2 结 果 18 2.1hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 的培养 18 2.2hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 的鉴定 19 3 讨 论 21 4 结 论 22 第二部分 hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 的DCFH-DA 探针浓度选择 23 1 材料与方法 24 1.1 主要实验材料24 1.2 主要仪器及耗材24 1.3 主要实验试剂24 1.4 主要试剂的配置25 1.5 实验方法25 1.6 观察指标26 2 结 果 26 2.1 干预前三种细胞形态学情况26 2.2 干预后流式细胞仪检测ROS 表达水平26 4 山西医科大学硕士学位论文 3 讨 论 27 4 结 论 28 第三部分 H O 干预对hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 活性氧水平的影响 29 2 2 1 材料与方法 29 1.1 主要实验材料29 1.2 主要仪器及耗材及主要实验试剂30 1.3 主要试剂的配置30 1.4 实验方法30 1.5 观察指标31 2 结 果 31 2.1 干预后流式细胞仪检测ROS 表达水平31 3 讨 论 32 4 结 论 33 参考文献 34 综述 39 致谢 50 个人简介51 5 山西医科大学硕士学位论文 H O 干预对不同来源间充质干细胞活性氧水平的影响 2 2 摘 要 目的： 1.分离人子宫内膜间充质干细胞（human endometrial mesenchymal stem cell ， hEMSCs ），并对hEMSCs 、人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells，hADSCs ）、人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells ，hUCMSCs ）进行间充质干细胞鉴定。 2.摸索2,7-二氯荧光素二乙酸酯 （DCFH-DA ）探针最适合浓度； 3.研究H2O 2 干预对hEMSCs 、hADSCs、hUCMSCs 细胞内活性氧（Reactive oxygen species ，ROS ）水平的影响。 方法： 1.hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs 的获取及鉴定：采用酶消法自子宫内膜组织提 取hEMSCs 。hADSCs、hUCMSCs 由合作单位山西大学生物医学研究院提供。观察三 种细胞形态，采用流式细胞仪检测三种细胞表面特异性抗原。检测三种细胞成脂、成 骨及成软骨细胞的分化能力。 2.采用第四代 hEMSCs 、hADSCs、hUCMSCs，分别加入不同浓度DCFH-DA 探 针孵育30min ，采用流式细胞仪测定细胞绿色荧光百分比，确定最佳浓度。 3.采用第四代 hEMSCs 、hADSCs、hUCMSCs，分别加入不同浓度 H2O2 作为实 验组，采用DCF 试剂盒中DCFH-DA 探针孵育30min ，共干预1h 后采用显微镜观察 细胞形态，采用流式细胞仪测定细胞绿色荧光发光强度，即ROS 表达