HOXA9对失神经_神经再支配骨骼肌的作用机制研究.pdf

目 录 中文摘要 I 英文摘要 II 常用缩写词中英文对照表 III 前 言 1 1 材料与方法 2 1.1 体外建模 2 1.2 原代肌卫星细胞提取及培养 2 1.3 免疫荧光染色 3 1.4 质粒转染 3 1.5 肌湿重比计算 3 1.6 免疫组化 3 1.7 肌纤维横截面积测量 4 1.8 Western blot4 1.9 RT-PCR 5 1.10 TUNEL5 1.11 统计分析 5 2 结 果 6 2.1 神经损伤后骨骼肌萎缩分析 6 2.1.1 肌湿重与肌纤维直径 6 2.1.2 HOXA9 系统表达变化 8 2.2 体外分析 HOXA9 对肌卫星细胞的调节作用 10 2.2.1 HOXA9 抑制肌源性分化和增殖，但不损害肌卫星细胞的分化潜能 .. 11 2.2.2 HOXA9 促进肌卫星细胞萎缩信号的表达 13 2.2.3 HOXA9 促进肌卫星细胞凋亡 15 3 讨 论 17 4 结 论 19 参考文献 20 综述 25 致 谢 33 山西医科大学硕士学位论文 HOXA9 对失神经/神经再支配骨骼肌的作用机制研究 摘 要 目的： 探讨HOXA9 在骨骼肌失神经萎缩及神经再支配过程中的作用及具体机制。 方法： 在三种不同类型的神经损伤条件下（坐骨神经离断切除：失神经组；坐骨神经离 断后立即端对端手术修复：修复组；假手术：假手术组），详细检测并分析SD 大鼠 腓肠肌中HOXA9 及其上游调控因子（MLL1 和WDR5 ）随萎缩进展的表达变化。随 后，分别用空白pIRES2-DsRed2 质粒、pIRES2-DsRed2-HOXA9 质粒、空白pPLK/GFP- Puro 质粒、以及pPLK/GFP-Puro-HOXA9 shRNA 质粒转染原代肌卫星细胞，体外探 究Hoxa9 的具体作用机制。 结果： 我们发现，神经损伤后骨骼肌中HOXA9 蛋白表达量与肌萎缩程度同步相关，而 MLL1 和WDR5 的表达虽然同样受失神经所影响，但关系并不是很密切。体外实验显 示HOXA9 抑制了肌卫星细胞成肌分化，影响了已知的萎缩信号通路，促进了细胞凋 亡，但并未消除肌卫星细胞的分化潜能。 结论： HOXA9 可能通过调节肌卫星细胞的活性促进失神经肌肉萎缩。 本课题为复旦大学附属华山医院手外科、卫生部手功能重建重点实验室、 上海市周围神经显微外科重点实验室开放课题 “Hoxa9 参与失神经骨骼肌萎缩 的作用及机制研究” （17DZ2270500） 关键词：肌萎缩；骨骼肌；失神经；神经再支配；肌卫星细胞 I 山西医科大学硕士学位论文 Modulation of HOXA9 after skeletal muscle denervation and reinnervation Abstract Objective: To investigate the mechanism of HOXA9 in skeletal muscles after peripheral nerve injury and reinnervation. Methods: We performed detailed time-dependent expression analyses of HOXA9 and its promoters, MLL1 and WDR5, in rat gastrocnemius muscles after three types of sciatic nerve surgeries: nerve transection (den