XXXX年 分子生物学实验(1).pptxVIP

分子生物学实验; 要 求 1、实验室内禁止饮食、勿高声谈话、随意走动。 2、课前预习、课中认真操作和课后的实验报告。 3、妥善保管好每组的实验器具。 4、实验操作要求人人动手。 5、每次实验完毕要验加样枪的准确性，然后做好值日卫生工作。;第3周;时间分配; 学习DNA的酶切、纯化及外源片段与载体的连接，将T载体上所携带的外源DNA酶切片段亚克隆到表达载体上。;实验材料： 外源片段DNA——CHY基因的PCR产物； 载体——pET28a-egfp（含有绿色荧光蛋白DNA片段）； BL21感受态细胞（鼎国公司）； 培养皿； 37℃摇床及培养箱。 实验试剂： 限制性内切酶(EcoRI; XhoI) （TaKaRa公司）； T4 DNA连接酶； LB液体培养基和固体培养基； 卡那霉素（kana）:工作浓度100μg/mL； 氯仿/异戊醇（24:1）；无水乙醇；3M NaAc；70%乙醇；ddH2O。 ;四、实验步骤 ;6．连接反应（15μl体系）：;8.制备含有适当抗生素的LB培养基平板。 9.筛选培养： 取转化反应液200 ?l，均匀涂布于含有Amp抗性的LB培养基平板上。 将涂布好的平皿置37?C平放20 min，然后倒置培养12-16 h。 （期间应