外源基因表达的检测及遗传特性.pptVIP

第三篇外源基因的表达、检测及遗传特性 第一章转化外源基因在植物细胞中的表达调控 第二章外源基因整合的鉴定 第三章外源基因表达的检测 第四章转基因植物的遗传特性 第一章转化外源基因在植物细胞中的表达调控 第一节转化外源基因的瞬时表达和稳定表达 第二节DNA序列对转化外源基因表达的调控 第三节DNA甲基化对转化外源基因表达的调控 第四节提高转化外源基因表达的策略 第一节转化外源基因的瞬时表达和稳定表达 转化外源基因的瞬时表达 在合适的条件下,转化的外源基因通常 在数小时后就能检测到其表达的产物,并在 1-2天内达到最高值,随后又逐渐降低,至 十多天后完全消失。这种短时间内的外源基 因表达称之为瞬时表达。 1外源基因瞬时表达的机制 (1)瞬时表达是未整合的外源基因的表达 (2)瞬时表达是一种正常的表达方式 基因扩增是指细胞内某些特定基因的 拷贝数专一性地大量增加的现象。扩增的 基因片断游离在细胞核内。 2外源基因瞬时表达的影响因素 (1)质粒DNA的基因结构; (2)细胞内源核酸酶的影响 (3)受体细胞生理状态及其内源GUs酶抑 制剂的影响; 3外源基因瞬时表达的应用 (1)在基因转化研究中的应用 ①农杆菌转化能力的检测 ②优化基因转化条件,选择导入DNA的方法,确定 农杆菌共培养的时间等 (2)植物基因表达调控的研究 ①启动子、增强子、内含子、终止子的功能研究 ②外界因素对基因表达调控的影响 ③植物激素的调控机理。 转化外源基因的稳定表达 所谓稳定表达是指外源基因整合到和基因 组DNA分子上,并能稳定地遗传的外源基因的 表达。需符合以下条件 (1)表达时间长,无迅速衰退现象; (2)DNA已整合到植物基因组中; (3)能够传递给后代,并符合分离规律。 第二节DNA序列对转化外源基因表达的调控 植物基因工程中常用的启动子 按作用方式及功能不同可将启动子分为三类: 1.组成型启动子 2.组织特异性启动子 3.诱导型启动子 1.组成型启动子 在该类型启动子控制下,结构基因的表达 大体恒定在一定水平上,在不同组织部为表达 水平也没有明显差异,为此称之为非特异性表 达组成型启动子。其特点是:表达具持续性 表达量相对稳定;不表现时空特异性;不受外 界因素诱导;在结构上存在六聚体花纹序列 TGACTG),往往以重复形式出现并被6-8 个核苷酸隔开。 (1)CaMV35s启动子 该启动子来自花椰菜花叶病毒(CaMV),其转 录产物的沉降系数为35S,故名。 最近发现35S启动子可以划分为两个区域:从 90~+8为A区域,主要负责在胚根、胚乳的根及根 组织内表达;从343~-90为B区域,主要负责在胚 的子叶及成熟植株的叶组织及维管组织内表达,在B 区域内的增强子序列可以提高表达水平。