生物技术制药第2版第六章酶工程制药.pptVIP

第六章 酶工程制药;学习要求;本章主要内容;第一节 概 述;一、酶与酶工程;1. 酶（Enzyme）;酶工程：酶学、微生物学与工程学相互渗透结合、发展而形成的一门新的技术学科。 化学酶工程（初级酶工程）： 通过化学修饰、酶的固定化、化学合成等改善酶的性质，提高催化效率 生物酶工程（高级酶工程）： 通过DNA重组技术生产目标酶，定向修饰与改造获得突变酶、合成全新的酶等;二、酶工程研究的产生与发展;1908年，德国科学家从动物胰脏中提取出胰酶（胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶的混合物），并将胰酶用于皮革的鞣制。 1911年，美国科学家从木瓜中提取出木瓜蛋白酶，并将木瓜蛋白酶用于除去啤酒中的蛋白质浑浊物。 酶工程的名称出现在20世纪20年代，主要指自然酶制剂在工业上的规模应用。;1953年，Grubhoger 和 Schleith 提出了酶固定化技术 。 1969年，日本科学家在工业上利用固定化氨基酰化酶拆分了DL-氨基酸。 1971年，第一届国际酶工程会议提出酶工程的主要内容：酶的生产、分离纯化、酶的固定化、酶及固定化的反应器、酶和固定化酶的应用。;20世纪90年代，借助基因工程技术，可经过酶基因重组，利用微生物表达生产酶制剂。 基因工程+发酵技术+发酵设备;三、现代酶工程的研究内容;（一）疾病诊断 （二）疾病治疗 （三）药物生产 （四）分析检测;1. 通过酶活力变化进行疾病诊断;2. 用酶测定物质的量的变化进行疾病诊断;3. 酶在疾病治疗方面的应用;4. 酶在药物制造方面的应用;5. 酶在分析检测方面的应用;（2）酶联免疫(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 免疫检测：让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。 间接法ELISA检测 夹心法ELISA检测 竞争法ELISA检测 ;（3）酶标基因探针 将酶与DNA直接进行交联, 杂交后只要与酶的底物显色便能观察结果。 检测乙肝病人血清中的HBV DNA 检测转基因材料及其后代;（4）酶传感器;第二节 酶工程技术;1. 液体酶制剂： 稀酶液/浓缩酶液，纺织工业 2. 固体粗酶制剂： 粗酶液处理获得，皮革处理/纤维素水解等 3. 纯酶制剂： 结晶、分离纯化后获得，分析试剂/药用酶;学生授课;第三节 酶工程研究新技术;本节内容;一、核酶（ribozyme）;(一) 核酶的发现;T.Cech的研究工作;;S.Altman的研究工作;;启示：;1. 核酶：具有生物催化功能的RNA。;核酶与蛋白质酶的比较; I型内含子 剪接型核酶 mRNA前体自我拼接 II型内含子 内切核酸酶+连接酶 锤头核酶 剪切型核酶 发夹核酶 丁型肝炎病毒（HDV)核酶 RNA切割 蛋白质-RNA复合酶 ;（三）核酶在医药领域的应用;;外源性给药：直接将抗核酸酶降解的核酸注射到组织或细胞内。 内源性给药：利用基因疗法，借助逆转录病毒载体和腺伴随病毒运送核酶 ;;;二、脱氧核酶（deoxyribozyme ）;;核酶/脱氧核酶面临的问题;三、抗体酶（abzyme）;2. 抗体酶的特点; 相同点：都是蛋白质，都有特异性。 不同点： 1）抗体无催化活力，酶有催化活力。 2）酶是能与反应过渡态选择结合的催化物质，抗体是和基态紧密结合的物质。 3）酶的活性和合成受到代谢调节，抗体只有在抗原存在时才产生。; 酶的催化在于能结合底物产生过渡态，降低能障（反应的活化能）。 以过渡态类似物作为半抗原，诱导与其互补构象的抗体，使其具有催化活性，可观察到抗体催化相应底物发生化学反应。 直接免疫动物/杂交瘤技术/基因工程技术;（1） 诱导法——动物免疫技术+杂交瘤技术;;（1） 前药的设计和活化 抗肿瘤药物：喜树碱、阿霉素、依托泊苷;肿瘤治疗;戒毒;（1） 应用 有机合成中的应用 基础理论研究 在医疗上的应用;四、有机相的酶反应;（二）有机相酶反应具备条件 ;（三）有机相酶反应的溶剂体系;（四）有机相酶工程的应用;五、突变酶（mutational enzyme）;方法;应用;六、酶分子的定向进化;方法;方法;筛选策略;七、酶分子的化学修饰;酶分子修饰的种类;1. 酶的表面化学修饰 （1）大分子结合修饰 （2）侧链基团修饰 2. 酶分子内部修饰 （1）肽链有限水解修饰 （