第七章重组子的筛选与鉴定.pptx

基 因 工 程 原 理 Principles of Genetic Engineering; ;1.重组率;2. 转化率 转化菌中有一部分是重组子，还有非重组子。 重组子中存在非目的重组子。;由于重组率和转化率不可能达到理想极限，因此必须借助各种筛选和鉴定方法区分转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子与非目的重组子。;重组子的筛选与鉴定 ;“选择”（selection）和“筛选”（screening）的基本含义;第七章 重组子的筛选与鉴定 ;一、 遗传检测法 ;1．根据载体表型特征选择重组体分子;(1)抗生素抗性基因插入失活选择;pBR322;（1）四环素：;选择过程：;;1.PBR322含Ampr和tetr，具有Ampr和tetr表型。 2.在tetr任何一个酶切点插入外源基因片断，都会导致tetr失活。 3.转化插入外源基因的PBR322的菌液涂布于含Amp的平板上，存活者必定是转化子。（Ampr） 4.将存活菌复印在含tet的琼脂板上，对照2个平板，凡在Amp平板上生长而在tet平板上不生长的菌落，必定是带有外源基因的重组子。;（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程;更小的分子量和更高的拷贝数 β-半乳糖苷酶显色反应检测重组体 具有多克隆位点;;(2) β-半乳糖苷酶显色反应选择法;β-半乳糖苷酶法;?-半乳糖苷酶显色反应选择法;假阳性： 如果插入的外