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结核病实验室诊断技术及应用 结核感染现状 全球范围内结核病疫情急剧恶化 全球1/3人口(约20亿)已感染了结核菌,人口的大规模流动 结核病与艾滋病同时流行 结核菌耐多药菌株的出现 我国是世界上仅低于印度和印尼的第三结核病大国 患病率高,新发患者93万/年,结核菌感染率为终 死亡率高,每年死亡人数达13万 耐药率高 早期快速诊断与治疗成为制约结核病防控的关键因素2015 常规结核病实验室检测方法诊断阳性率不到60%。 《摘自2014年中国结核病监测报告》 结核病检测技术发展历程 分子诊断时代 DNA诊断: RNA诊断: PCR TMA 细菌法 免疫学检测: LAMP NASBA 直接镜检 Ab Ag PPD 体外培养 T-SPOT SAT 基因芯片 19世纪中叶 20世纪60年代 20世纪80年代 20世纪90年代 ■灵敏度低 ■血清学检测 ■交叉污染 ■高灵敏度 ■检测周期长 WHO不推荐 仪器要求复杂 ■高特异性 ■成本低 ■r干扰素释放实反应抑制 题交叉污染少 一、细菌法直接涂片 (阳性率低-5000以上细菌/ml; 不能区分真假、死活) 线 Muuaesie i 、细菌法國结核菌的培养 结核病病原学诊断的金标准 (培养时间长是其软肋) 细菌学检测的新方法 提高阳性率 发光二极管荧光显微镜(LED) 液体培养(可同时缩短培养时间) 自动化涂片/染色技术(夹层杯法) 不能区分真假、死活;培养仍是金标准 但耗时长、 分枝杄菌固体培养与液体培养比较 液体培养 固体培养 ( BD MGIT960)(罗氏LJ) 疑似新发患者报阳时间 (d) 13.63±7.14 28.67±10.04 复诊患者报阳时间(d)22.94+9552853+10.40 疑似新发患者阳性率 32.00% 17.90% 复诊患者阳性率9 2.60% 污染率 6.57% 4.0% 液体培养在提高阳性率、缩短报阳时间上均优于固体培养。 仍然不能满足临床快速诊断的需要 吴学兵,陆彬,桂晓虹等。液体MG∏培养法在结核分校杆菌检测中的应用评估。检验医学,2013,3(28):211-214 免疫学检测 血清学检测(抗体、抗原) 结核菌素试验(灵敏度、特异性?) 结核感染T细胞检测(y-干扰素检测) WHO关于血清学检测声明 2011年7月20日,世界卫生组织(WHO)正式声明,要 求禁止将血清学检测方法(抗原,抗体,蛋白芯片等)用 于肺结核和肺外结核的诊断。 WHO warns against the use of inaccurate commercial serological tests for pulmonary and extra-pulmonary TB 蛋白质组学的发展 3、4、7种结核杆菌优势表位抗原 (16KD、38KD、MPT64、EsAT-6、CFP10、Mtb8、Mb84 tb163)制备多靶点蛋白微阵列匚 大量的文献报道其敏感性 特异性均显著高于涂片与培养法匚可用于结核病的临床辅助诊 断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检测率 参考文献略 World Health Organization Y-千扰素释放实验( IGRAS) Interferon-Gamma Release assays 干扰素 检测阴性 γ干扰素 检测阳性 B抗原多 丁细胞 活化T胞 丫十扰素