生物制药技术 发酵产物的提取与精制 第八单元 发酵产物的提取和精制.docVIP

《生物制药技术》课模块教学设计方案 学习内容 第八单元 发酵产物的提取和精制 课时 6 教学目标 专业能力 1.能准确陈述发酵液的特点。 2.能陈述发酵产物提取与精制的一般工艺过程。 3.能陈述发酵液预处理的常用措施。 4.能陈述固液分离的常用方法。 5.能陈述细胞破碎的常用方法及原理。 6.能根据要求，选择合适的细胞破碎方法 7.能陈述提取的主要方法。 8.了解常用提取方法的原理和基本操作 9.能准确陈述青霉素提取的原理。 10.能根据规程，完成青霉素的提取。 11.能陈述精制的主要方法。 12.了解常用精制方法的原理和基本操作。 13.能准确陈述青霉素精制的方法。 14.能根据规程，完成青霉素的精制。 方法能力 自学能力、执行力、团队协作能力 社会能力 培养团队协作意识。 目标群体 学生学习了《生物化学》《微生物学》等前期课程，具备了学习本课程的基础知识。 教学环境 多媒体教学 教学方法 讨论教学、分组教学 时间安排 教学过程设计 第1节 第2-3节 任务一 发酵产物的提取与精制概述 一、下游加工过程的特点 1、成分复杂：细胞、代谢产物、残余培养基 2、产品浓度低：传统发酵一般1～10％ 3、收率低：50％左右 4、失活问题 5、不稳定性 6、生物安全问题 二、发酵产物提取与精制的过程 1、对未知的发酵产品提取的步骤 （1）确定发酵产物的类型（2）确定发酵产物的稳定性 2、发酵产物提取和精制过程 （1）发酵液的预处理 ： 离心和过滤 （2）产品的提取：萃取、吸附、沉淀、蒸发 （3）产品的精制：层析、膜分离、离子交换、沉淀、电泳 （4）产品的最后加工：结晶、干燥、蒸馏 任务二 发酵醪的预处理 一、发酵醪的一般特征 1、含水量高，一般可达90％～99% 2、产品浓度低 3、悬浮物颗粒小，密度与液体相差不大 4、固体粒子可压缩性大 5、液体黏度大，大多为非牛顿型流体 6、产物性质不稳定 二、发酵醪预处理的目的和要求 1、预处理的目的： （1）改变发酵液的物理性质，促进悬浮液中分离固形物的速度， 提高固液分离器的效率 （2）尽可能使产物转入便于后处理的某一相中（多数是液体） （3）去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作 2、发酵醪预处理的要求: （1）菌体的分离 （2）固体悬浮物的去除 （3）蛋白质的去除 （4）重金属离子的去除 （5）色素、热原质、毒性物质等有机杂质的去除 （6）改变发酵醪的性质 （7）调节适宜pH值和温度 三、预处理的方法： 1、加热法：2、调节悬浮液的pH 3、凝聚和絮凝4、添加助滤剂5、添加反应剂6、添加酶制剂： 四、菌体的分离方法 （1）离心分离：管式高速离心机、碟片式离心机 （2）过滤：真空过滤机、板框过滤机、 五、细胞破碎 机械法：珠磨法、高压匀浆法、超声波破碎法、X-press法等 非机械法：酶溶法、化学渗透法、冻融法、干燥法等 1.球磨机 研磨是常用的一种方法，它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使达到细胞的某种程度破碎。这些装置的主要缺点是在破碎期间样品温度迅速升高，通过用二氧化碳来冷却容器可得到部分解决。 第4节 2.高压匀浆器 3.X-press法 一种改进的高压方法是将浓缩的菌体悬浮液冷却至-25?C至-30 ?C形成冰晶体，利用500 MPa以上的高压冲击，冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。细胞破碎是由于冰晶体的磨损，包埋在冰中的微生物的变形所引起的。 该法的优点是适用的范围广，破碎率高，细胞碎片的粉碎程度低以及活性的保留率高，该法对冷冻—融解敏感的生化物质不适用。 4.超声波法 细胞的破碎是由于超声波的空穴作用，从而产生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性漩涡在介质中的悬浮细胞上造成了剪切引力，促使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。 对于不同菌种的发酵液、超声波处理的效果不同，杆菌比球菌易破碎、革兰氏阴性菌细胞比革兰氏阳性菌细胞容易破碎，对酵母菌的效果极差。 该法不适于大规模操作，因为放大后，要输入很高的能量来提供必要的冷却，这是困难的。 5.酶解法 利用酶反应，分解破坏细胞壁上特殊的键，从而达到破壁的目的。 优点：专一性强，发生酶解的条件温和。 缺点：酶水解费用较贵，一般只适用于小规模的实验室研究。 6.自溶作用 是酶解的另一种方法，所需溶胞的酶是由微生物本身产生的。影响自溶过程的因素有温度、时间、pH缓冲液浓度、细胞代谢途径等。自溶法在一定程度上能用于工业规模，但是，对不稳定的微生物容易引起所需蛋白质的变性，自溶后的细胞培养液过滤速度也会降低。 7.化学法 用酸碱及