生姜内参基因的筛选及生姜ZoARF2基因载体构建.pdfVIP

摘要 摘要 Zingiber officinale Roscoe 生姜 （ ）作为药食同源的香辛类作物，具有较高的食 用价值与经济价值。研究生姜中一些重要的功能基因对生姜的生长发育有着重大帮 助。实时荧光定量PCR 技术是目前分析基因表达的重要方法，而稳定的内参基因是 准确定量基因表达水平的先决条件。由于生姜数据库的不完善，生姜中尚未筛选出 稳定的内参基因，因此对生姜的内参基因的筛选必不可少。本试验以生姜为研究对 象，应用qRT-PCR 技术，研究生姜在采后失水处理后和生姜不同部位中在 11个候 geNorm NormFinder Bestkeeper 选内参基因的表达情况。再利用 、 、 三个软件分析后 确定候选内参基因的表达稳定性，以及引入的内参基因数量，从而更好的为生姜目 的基因表达分析进行校正。经试验研究后，发现ACT2 和TUB2 两个基因可作为生 3 姜不同部位定量分析时内参基因，需引入的 个内参基因来进行校正。在生姜失水 处理后，TUB2 在一定程度上适合作为定量分析的内参基因，推荐使用2 个内参基 因组合作为在基因表达定量分析校正。表明在生姜所有的样品中 （生姜的不同部位 和生姜失水处理），最适合作为内参定量分析的为TUB2 基因。 生姜的食用部分为地下肉质根状茎，根状茎是重要的产品器官，对于产量的形 成具有重要的意义，但是关于生姜根茎膨大的分子机制尚不清楚。在已报道的物种 中，发现ARF2 基因是一个多效性的转录因子，对植物的在不同生长发育阶段及发 挥着重要的作用。从生姜前期转录组测序中发现ARF2 基因在根茎膨大过程中表达 量较高，猜测ZoARF2 基因可能会对生姜地下根状茎发育起着调控作用，因此选择 ARF2 基因作为本试验的研究对象。本试验通过对生姜ZoARF2 蛋白的理化性质分 析，发现该蛋白为可溶性蛋白，但不稳定。通过氨基酸序列推测ZoARF2 蛋白可能 具有激活功能。依据ARF 蛋白的氨基酸序列的同源关系，发现它与葡萄、水稻、拟 南芥等ARF2 氨基酸序列在保守区域内有较高的同源性。通过qRT-PCR 分析发现， 生姜ZoARF2 基因在根、根状茎、茎、叶中均有表达，其中在叶片的表达量最高， 根状茎的表达量仅次于叶的表达量。不同组织间的表达具有一定的差异性，表明该 基因可能参与了生姜在不同组织间发挥着不同的调控作用。 另外本试验成功的构建出ZoARF2 的表达载体，为进一步深入研究ZoARF2 的 功能提供了基础。 I 重庆三峡学院硕士毕业论文 综上，本文研究的结果为生姜内参基因选择和基因表达分析提供了重要的理论 参考及技术支持，为后续生姜基因功能研究和根茎膨大机理研究奠定了基础等。 关键词：生姜、内参基因、qRT-PCR、ZoARF2 基因、载体构建； II ABSTRACT Abstract Ginger, as a kind of herb with the same origin of medicine and food, has high edible value and economic value.The study of some important functional genes in ginger is of great help to the growth and development of ginger.Real-time fluorescence quantitative PCR is an important method to analyze gene expression, and stable internal reference