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活体动物体内成像技术
李富荣
主要采用生物发光与荧光两种技术
生物发光:用荧光素酶基因标记细胞或DNA.
荧光技术:采用荧光报告基团(GFP、RFP,
Cy5及Cy7等)进行标记。
技术优势
●利用一套非常灵敏的光学检测仪器,让
研究人员能够直接监控活体生物体內
的细胞活动和基因行为。
●通过这个系统,可以观测活体动物体内
肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展
过程、特定基因的表达等生物学过程。
●传统的动物实验方法淠要在不同的时间点宰
杀实验动物以获得数据,得到多个时间点
的实验结果,
●可见光体内成像通过对同一组实验对象在不
同时间点进行记录,跟踪同一观察目标
(标记细胞及基因)的移动及变化,所得的
数据更加真实可信。
●这一技木对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极
高,不涉及放射性物质和方法,非常安全。
●因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度
高等特点,在刚刚发展起来的几年时间内
已广泛应用于生命科学、医学研究及
药物开发等方面。
1.标记原理
生物发光:是将Fluc基因整合到细胞染色体DA上以
表达荧光素酶,当外源(腹腔或静脉注射)给予其
底物荧光素( luciferin),即可在几分钟内产生发光
现象。这种酶在ATP及氧气的存在条件下,催化荧光
素的氧化反应才可以发光,因此只有在活细胞内才
会产生发光现象,并且光的强度与标记细胞的数目
线性相关
生物发光成像系统组成
以精诺真公司的ⅠⅥIS100为例,体内可见光成
像系统主要由三部分组成
(1)CCD镜头:选择适当的CD镜头,对于体内可见
光成像是非常重要的。
(2)成像暗箱:像暗箱屏蔽宇宙射线及一切光源,
可以使暗箱内部保持完全黑暗.CCD所检测的光线
完全由被检动物体内发岀,避免外界环境的光污
(3)软件系统:软件系统负责仪器控制和图像分析。
精诺真( Xenogen)活体化学发光和荧光成像系统
ightools活体荧光成像系统
标记细胞的方法:通过分子生物学克隆技术,
将荧光素酶的基因插到预期观察的细胞的染
色体内,通过单克隆细胞技术的筛选,培养
出能稳定表达荧光素酶的细胞株。
结果观察:将标记好的细胞注入小鼠体内后,
观测前需要注射荧光素酶的底物—荧光素,
为约280道尔顿的小分子。注射一次荧光素能
保持小鼠体内荧光素酶标记的细胞发光30-45
分钟。应用一个高度灵敏的制冷CCD相机及特
别设计的成像暗箱和成像软件,
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