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乙酰胆碱酯酶酶活的测试
作者：陈志坚
1 准备工作
0.1mol/L pH=8.0 的磷酸缓冲液： NaH2 PO4 1.68g ，Na2HPO4 12.21g 溶于 1L 水。
2 酶液制备
SD 大鼠，断头处理后，冰台快速取大脑，放入玻璃皿中，玻璃皿加入少量冰冻的磷酸
盐缓冲液 ( 磷酸盐缓冲液漂洗， 用干净的滤纸吸去大脑组织表面的水分和血液， 称质量 ) ，
用眼科剪尽快剪碎组织块。 将剪碎的组织倒入玻璃匀浆器中， 再用少许冰冻磷酸盐缓冲液冲
洗残留在烧杯中的碎组织块， 一起倒入匀浆器中进行冰浴匀浆。 然后再加入冰冻的磷酸盐缓
冲液，按脑组织质量与匀浆总体积 1:10 的比例，稀释混匀。将制备好的 10%脑匀浆以
3000r/min 离心 15min ，取上清液待测。
3 酶活性抑制测试
3.1 配药液
参照脲酶实验
3.2 DTNB 5,5- 二硫代双 (2- 硝基苯甲酸 )、ATCh碘化硫代乙酰胆碱
0.0314mol/L DNTB ，0.0314mol/L ATCH
3.3 酶活测试
在 3.00ml 磷酸盐缓冲液 (0.lmol/L,pH=8.0) 中加入 20uL 酶液 ,混匀后 37℃保温 20min 后 ,
依次加入 100ulDTNB 溶液 (终浓度 1.0mmol/L) 和 20uLATCh溶液 (终浓度 1.0mmol/L), 充分混合 ,
反应体积为 3.14mL 。在 412mn 处用 1cm 比色皿，每隔 0.5min 读数 ,连续测定 3min 。酶活力
定义为每克脑蛋白每分钟水解底物的 umol 数。这是未加药酶活力为 E1。
在 2.98ml 磷酸盐缓冲液 (0.lmol/L,pH=8.0) 中加入 20uL 酶液， 并加入不同浓度的药物 （一
个浓度测定一次） ，依次加入 100ulDTNB 溶液 (终浓度 1.0mmol/L) 和 20uLATCh 溶液 (终浓度
1.0mmol/L), 充分混合 ,反应体积为 3.14mL 。在 412mn 处用 1cm 比色皿，每隔 0.5min 读数 ,连
续测定 3min 。计算出此时酶活，为 E2。
抑制率计算公式为 I （%）=(E1-E2)/E1*100%
得到一系列不同浓度的抑制率以后，利用 SPSS计算出药物的 IC 。
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