蛋白质一级结构测定精品课件.pptVIP

木瓜蛋白酶： 专一性差 断裂位点：对Arg和Lys残基的羧基端肽键敏感 葡萄球菌蛋白酶： 高专一性 断裂位点：Glu和Asp残基的羧基端肽键 ——磷酸缓冲液 Glu残基的羧基端肽键 ——碳酸氢铵、醋酸铵缓冲液） 梭菌蛋白酶： 高专一性 断裂位点：Arg残基的羧基端肽键 溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 化学法 ---选择性地切割由Met羧基形成的肽键 溴化氰水解法(Cyanogen bromide) N末端的测定 二硝基氟苯法（DNFB法）；二甲氨基萘磺酰氯法(DNS-CL 法）；异硫氰酸苯脂法（PITC 法）； C末端的测定 羧肽酶法；硼氢化锂法；肼解法 （2）多肽链的末端氨基酸测定 N末端测定方法比较C末端更加成熟、可靠和准确，主要的方法有： 二硝基氟苯法（DNFB法） 肽链N末端氨基与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应，生成二硝基苯的衍生物（DNP-肽），其经酸水解后生成的DNP-氨基酸可用有机溶剂（如乙酸乙酯）抽提，再与其他氨基酸分开，鉴定得知N末端的氨基酸。 N末端的测定 * 蛋白质的一级结构的测定 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。 自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的