蛋白质分子量测定方法研究进展精品课件.pptVIP

凝胶层析的固定相是惰性的柱状凝胶颗粒，颗粒内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。不同分子大小组分的样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子的大小。对同一类型的化合物，洗脱特性与组分的分子量有关，流过凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的走在前面。 * 蛋白质分子质量测定方法概述 目录 其他方法 SDS凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术是实验室进行蛋白质研究中最常用的技术，兼有电泳和分子筛的双重作用。 SDS是一种阴离子去污剂，可使蛋白质变性，与其蛋白质结合成带负电荷的蛋白质-SDS复合体，消除电泳过程中蛋白质所带电荷对电泳结果的影响，从而保证蛋白质电泳仅受分子质量大小的影响。在一定的电场作用下，该复合体沿着以聚丙烯酰胺凝胶形成的分子筛向电场的正极移动，从而将蛋白质根据他们的分子量大小而分开。 蛋白质-SDS复合体：形状一定、电荷密度一定 SDS凝胶电泳 上样：防止样品溢出、正负极、电压 SDS凝胶电泳 当蛋白质分子量在10-200kDa时，样品的迁移率和分子量的对数呈对数关系，符合如下方程式： lgMW = -b﹒Rf + K 其中，MW为蛋白质分子质量，Rf为相对迁移率，b为斜率，K为截距，当条件一定时，b和K为常数。 因此通过已知分子量的蛋白和未知分子量蛋白的比较，就能得出未知蛋白的分子量。 影响分子量测定的因素