蛋白质和多肽的氨基酸序列分析精品课件.pptVIP

末端分析通常采用专一性化学试剂与末端氨基或羧基反应，然后分解出被作用的末端氨基酸加以测定。由于与羧基反应的活化能相当高，所以用于与羧基反应的专一性试剂比较少，而N端测定的方法较多。氨肽酶及羧肽酶等外切酶也常有应用。 下面介绍常用的N-末端和C-末端测定的方法，以及封闭N-末端的测定。 二、C-末端的测定 三、封闭N-末端的测定 第二节 蛋白质的末端测定 一、N-末端的测定 一、N-末端的测定 N末端测定方法比C末端更加成熟、可靠和准确，主要的方法有： 1、二硝基氟苯法（DNFB法、Sanger法） 2、二甲氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法） 3、异硫氰酸苯酯法（PITC法） 4、DABITC法 5、氨肽酶法 1、二硝基氟苯法（DNFB法、Sanger法） 二硝基氟苯在弱碱性条件下，与肽链的N端氨基作用，形成二硝基苯基肽链（DNP-肽），经酸水解后，N端残基成为二硝基苯基（DNP）-氨基酸，可用有机溶剂（如乙醚）抽提，再进行纸层析或薄层层析后，根据层析斑点的位置作定性鉴定。 FDNB不仅与N-末端的α-氨基起反应，也与侧链上的ε-氨基、巯基、酚羟基和咪唑基反应，但水解产物极性较强，不被乙醚抽提，而不干扰末端的测定。 当N-端残基为脯氨酸或羟脯氨酸时，因DNP-脯氨酸或DNP-羟脯氨酸在盐酸水解条件下极