蛋白质样品的制备精品课件.pptVIP

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  • 2020-09-10 发布于江苏
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一、裂解液 在蛋白质组学研究中,蛋白质裂解是一个重要的环节。蛋白质间的分开与疏远程度关系到双向电泳的分离效果。选择适宜的裂解剂能够实现蛋白质间的良好分离,是提高双向电泳分离效果的一个有力措施。 ⑴ 离液剂 尿素是常用的离液剂,它的主要作用是改变或破坏氢键等次级键的结构,使得蛋白变性并使蛋白酶失活。尿素作为一种中性的离液剂,通常在裂解液中的浓度为8mol/L。尿素可溶解和解折叠大多数的蛋白质,形成完全随机的构象,使所有的离子基团暴露于溶液中。近来硫脲的加入可以进一步提高溶解度,特别是膜蛋白。在实际应用中,需要高溶解强度时,一般用2mol/L硫脲和5-8mol/L的尿素联合使用。 ⑵ 还原剂 还原剂主要是用来断裂蛋白分子中Cys残基之间形成的二硫键,增加蛋白的溶解性。通常用的还原剂有β-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)或二硫赤藓糖醇(DTE)和三丁基膦(TBP),目前常用的是DTT。 ⑶ 去污剂(表面活性剂) 去污剂主要是通过破坏蛋白之间的疏水相互作用,以确保蛋白完全溶解和防止通过疏水相互作用导致蛋白聚合。去污剂有离子型、非离子型和兼性离子型等几类。经常使用的有阴离子去污剂SDS,非离子去污剂NP-40和TritonX-100,两性离子去污剂CHAPS。原则上去污剂应该是非离子型或者是兼性离子型,这样才不会影响蛋白质的迁移位置。

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