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分子生物学常用技术 ;分子生物学常用技术;第一节 凝胶电泳(gel electrophoresis);电泳的用途 分离 鉴定纯度 测定分子量 凝胶电泳的种类 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;一、琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis);（一）分离核酸原理 ;1. 电荷效应;;2.分子筛效应;3. 分子构象;（二）操作要点;1. 支持物;商品化的琼脂糖;琼脂糖种类;2. 凝胶浓度的选择;凝胶的制备;;;3. DNA marker ;DNA marker;DNA 长度标准曲线;4. 电泳缓冲液;5. 样品制备 ;点 样;6.电泳条件;潜水电泳;7.电泳染色;EB染色原理;;紫外灯??显色;8. DNA片段的回收;（三）应用范围;琼脂糖凝胶电泳;二、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE) ;（一）分离原理;PAGE支持物;聚丙烯酰胺凝胶;（二）操作要点;1. 凝胶的分类;2. 凝胶浓度的选择;;3. 凝胶液的配制;PAGE装置;;;;电 泳;4. 凝胶中DNA的检测;5.DNA片段的回收;（三）PAGE优点;（四）PAGE应用范围;第二节 分子杂交;一、分子杂交的基本原理;分 子 杂 交;DNA-RNA;杂交条件;杂交种类;二、固相支持物;固相支持物的种类;1.硝酸纤维素滤膜 ;2. 尼龙膜;分子生物学考试;三、探针(probe);1. 探针的概念;2. 探针的类型;3. 标记物的种类;4. 核酸探针的放射性标记方法; 缺口翻译;随机引物标记法(random priming) ;;DNA的5’末端标记(5’end labeling);DNA的5’末端标记;四、Southern 杂交;1. 印迹的方法 ;毛细管转移法 ;电转移法;真空转移法;;2. Southern 杂交的步骤;3. Southern 杂交的应用;五、Northern 杂交;Northern 杂交;六、Western 杂交;;免疫印迹; Southern,Northern Western;七、原位杂交(in situ hybridization);组织切片;;八、斑点杂交(dot hybridization);第三节 PCR技术;一、PCR的发展简史;二、PCR的基本原理和步骤;PCR的原理;PCR的扩增产物;标准的PCR反应体系;;三、PCR的影响因素;模板;引物;Taq DNA聚合酶 ;底物;Mg2+ ;循环条件;四、PCR的种类;原位PCR;实时PCR的原理;五、PCR的应用;分子生物学研究;临床医学;第四节 DNA序列测定;Sanger 双脱氧链终止法 ;DNA的复制;2’,3’-双脱氧核苷酸(ddNTP);;;DNA测序操作;DNA自动测序 ;DNA自动测序仪;第六节 生物芯片(Biochip);基因芯片;什么是基因芯片？;基因芯片;芯片的制备;基因芯片的种类;基因芯片的应用领域;表达谱基因芯片及其检测原理;检测原理;表达谱基因芯片;应用举例