锰矿物驱动的甲烷厌氧氧化菌的富集及甲烷厌氧氧化过程研究.pdf

中文摘要 摘 要 甲烷厌氧氧化 （AOM ）是一种重要的生化过程，作为自然界CH4 代谢的关键 环节，其削减了超过90 ％的海洋底层所产生CH 和约50%的淡水湿地CH ，使得 4 4 最终进入大气的 CH4 十分有限，因此甲烷厌氧氧化在地球碳循环过程中占有非常 重要的地位。研究人员在海洋和淡水系统中都观察到了金属驱动的甲烷厌氧氧化 现象，其速率可高达自然栖息地最大产甲烷率的 15％。在早期和现代地球上，金 属驱动的甲烷厌氧氧化在生物地球化学循环和地质演化中具有重要作用。锰广泛 存在于各种海洋和淡水环境中，但到目前为止，锰矿物驱动的甲烷厌氧氧化的相 关功能微生物和作用过程还鲜有人研究。 本试验通过构建序批式微生物富集反应器，分别以锰矿湿地污泥和自然混合 污泥作为接种物，以天然锰粉和人工合成-MnO2 为电子受体富集锰矿物驱动的甲 13 烷厌氧氧化(Mn-AOM)微生物，并结合 CH4 稳定同位素示踪、高通量测序、荧光 绝对定量（qPCR ）、荧光原位杂交(FISH)、系统发育分析和RDA 相关性分析等手 段，分析Mn-AOM 长期富集过程中的甲烷厌氧氧化效果，探索主导Mn-AOM 的 关键作用微生物种群及其介导AOM 的作用途径，分析锰矿物种类和污泥接种来源 对甲烷厌氧氧化的影响，探讨长期富集过程中AOM 速率与功能微生物丰度之间的 相关关系，明晰Mn-AOM 过程。主要研究结果如下: ① 经过700 多天的富集培养，4 个反应器均表现出明显的甲烷厌氧氧化效果。 长期富集过程中 （T 150d~700d ），反应器R1(湿地污泥+天然锰粉组) 、R2(混合污 泥+天然锰粉组) 、R3(湿地污泥+-MnO2 组) 、R4(混合污泥+-MnO2 组) 的平均CH4 -1 -1 -1 -1 -1 -1 氧化速率分别为：0.1270 mmol·L ·d 、 0.1598 mmol·L ·d 、0.2118 mmol·L ·d 、 -1 -1 0.1749 mmol·L ·d 。 ② 长期运行过程中 R3(湿地污泥+-MnO2 组)和 R4(混合污泥+-MnO2 组) 以 -MnO2 为电子受体的甲烷厌氧氧化菌富集效果要高于以天然锰矿粉为电子受体的 R1(湿地污泥+天然锰粉组)和R2(混合污泥+天然锰粉组)（p0.05 ）。R3 和R4 的AOM 速率更高，说明电子受体 Mn(IV) 的形态可以影响甲烷厌氧氧化菌的富集效果, 并 且以-MnO2 为电子受体的体系ANME-2d 古菌数量高于以天然锰粉为电子受体的 数量。试验发现，接种污泥会显著影响富集培养物的群落结构，两种不同接种污 泥的微生物群落结构存在明显差异。 13 ③ 稳定同位素实验富集培养物中的 CTIC 随着富集时间有明显的升高，证明 了以CH4 为唯一电子供体的甲烷厌氧氧化过程。电子守恒实验验证了在锰矿物还 原的同时伴随着甲烷氧化过程，并且实验中Mn （II ）的总产生量和CH4 的总减少 I 重庆大学硕士学位论文 量之间的比值为3.85±0.25 ，接近于CH4 和Mn(IV)反应的化学计量学比例4.32±0.36 ， Mn(IV) 的还原量和 Mn （II ）的生成量与CH4 的氧化量比值都接近4:1 ，符合锰矿 物驱动的甲烷厌氧氧化的化学计量学过程，证实了反应器内的甲烷厌氧氧化是以 Mn(IV)作为唯一的电子受体。 ④ 采用高通量测序、qPCR、FISH 等分子生物学技术鉴定出了ANME-2d 、产