2015版无菌检查法课件.pptVIP

2015 版 无菌检查法 姜珊 2014.10.07 1 无菌检查法 ? 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。若供试品 符合无菌检查法的规定 , 仅表明了供试品在 该检验条件下未发现微生物污染 2 环境洁净度 2010 版 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁净 度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行 2015 版 无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达 到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌 操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影 响供试品中微生物的检出。 3 培养基 ? 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于 厌氧菌 的 培养，也可用于需氧菌培养； ? 胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌 的培养 。 ? 制备好的培养基应保存在 2 ～ 25 ℃ 、避光的 环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3 周 内使用； ? 若保存于密闭容器中，一般可在一年内使 用。 4 培养基 PH 区别 2010 版 2015 版 改良马丁培养基 调节 pH 值使灭 菌后 为 6.4 ± 0.2 胰酪大豆胨液体 培养基 调节 pH 使灭菌 后 pH 值为 7.3 ± 0.2 营养肉汤培养基 调节 pH 值使灭 菌后 为 7.2 ± 0.2 胰酪大豆胨琼脂 培养基 调节 pH 使灭菌后 在 25 ℃ 的 pH 值 为 7.3 ± 0.2 营养琼脂培养基 调节 pH 值使灭菌 后为 7.2 ± 0.2 沙氏葡萄糖液体 培养基 调节 pH 使灭菌后 在 25 ℃ 的 pH 值 为 5.6 ± 0.2 改良马丁琼脂培 养基 调节 pH 值使灭菌 后为 6.4 ± 0.2 沙氏葡萄糖琼脂 培养基 调节 pH 使灭菌后 在 25 ℃ 的 pH 值为 5.6 ± 0.2 5 培养基的适用性检查 ? 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰 酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无 菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可 在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌 检查同时进行。 ? 无菌性检查 每批培养基随机取不少于 5 支 （瓶），置各培养基规定的温度培养 14 天， 应无菌生长。 6 培养基的适用性检查 ? 灵敏度检查 ? 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物 至 胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基 上，接种生孢梭菌的新 鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中， 30 ～ 35 ℃ 培养 18 ～ 24 小时；接种白色 念珠菌的新鲜培养物至 沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培 ? 养基 上， 20 ～ 25 ℃ 培养 24 ～ 48 小时 ，上述培养物用 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白 ? 胨缓冲液或 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100cfu （菌落形成单 位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养 物至 沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上 ， ? 20 ～ 25 ℃ 培养 5 ～ 7 天 ，加入 3 ～ 5ml 含 0.05 ％（ v/v ）聚山梨酯 80 的 pH7.0 无 菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或 0.9% 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适 宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05 ％（ v/v ）聚山梨酯 80 的 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 小于 100cfu 的孢子悬液。 7 培养基适用性检查直观区别 2010 版 2015 版 相应菌种接种所用 培养基 金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌 营养肉汤培养基中 或营养琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培 养基中或胰酪大豆 胨琼脂培养基 白色念珠菌 改良马丁培养基中 或改良马丁琼脂培 养基 沙氏葡萄糖液体培 养基中或沙氏葡萄 糖琼脂培养基 黑曲霉 改良马丁琼脂斜面 培养基 沙氏葡萄糖琼脂斜 面培养基 霉菌、酵母菌培养温度 23 ～ 28 ℃ 20 ～ 25 ℃ 稀释液 0.9% 无菌氯化钠溶 液 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或 0.9% 无菌氯化钠溶 液 8 培养基的适用性检查 ? 培养基接种 ? 取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养 基 7 支，分别接种小于 100cfu 的金黄色葡 萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各 2 支， 另 1 支不接种作为空白对照，培养 3 天；取 每管装量为 9ml 的 胰酪大豆胨液体培养基 7 支 , 分别接种小于 100cfu 的 枯草芽孢杆菌 、 白色念珠菌、黑曲霉各 2 支，另 1 支不接种 作为空白对照，培养 5 天。逐日观察结果。 9 培养基接种直观区别 2010 版 2015 版 硫乙