《基因工程的基本原理学案》.docx

《基因工程的基本原理学案》 张建尚/江苏 【学习目标】 站得高一一明确学习目标 。 简述DNA重组技术所需的三种基本工具。 认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 简述基因工程原理及基本操作程序。 尝试设计某一转基因生物的研制过程。 【重点和难点】 重点：1.DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。 基因工程基本操作程序的四个步骤。 难点：1.基因工程载体需要具备的条件。 2.从基因文库中获取目的基因和利用 PCR技术扩增目的基因。 【学法提示】 联系DNA分子的结构，理解限制酶、 DNA连接酶和载体的作用及特点，准确画出限制酶切 割产生的末端；通过比较掌握 DNA连接酶和DNA聚合酶的作用特点。 联系DNA复制、基因表达过程，理解PCF过程、基因表达载体的构建和目的基因的检测与 鉴定。 【课前预习】起步稳一一知识源于生活。 基因工程中使用的“分子手术刀”是 ，它能够识别 ② 的某种 ③ ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 ④ 断开，从而使 DNA DNA片段产 ⑤ 末端或 ⑥ 末端；基因工程中使用的“分子缝合针”是 ⑦ ，其作用是将 ⑧ “缝合”起来，恢复被限制酶切开了的 ⑨ ; 基因进入受体细胞的载体被称为 “ ⑩ ”,常用的载体有 (11) 等。 作为载体DNA必须具备的特点有：①具有一个至多个 ① ，供外源DNA片 段插入其中；②携带外源DNA进入受体细胞后，停留在细胞中进行 ② ，或者整合到 染色体DNA上，随染色体 DNA进行 ③ 。③具有特殊的 ④ ，供重组DNA的 ⑤ ;④载体DNA必须是安全的。 基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤： 、 ② ③ 和 ④ 。 获取目的基因的方法有以下几种： ① 、 ② 、 ③ 。基因表达载体的构建是基因工程的 ④ ， 一个基因表达载体的组成除了 ⑤ 夕卜，还必须有 ⑥ 、 ⑦ 以及 ⑧ 等。其中 ⑨ 是RNA聚合酶识别和结合的部位。 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是 ① ， ② 是转基因动物 中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。 转化大肠杆菌细胞时要 先用 ③ 处理细胞，使其成为 ④ 细胞。用 ⑤ 方法可以检 测转基因生物染色体的 DNA上是否插入了目的基因，用 ⑥ 方法可以检 测目的基因是否转录出了 mRNA用 ⑦ 方法可以检测目的基因是否翻译成蛋白 质。除了上述分子检测外，有的还需要进行 ⑧ 的鉴定。 答案1.①限制性核酸内切酶(限制酶)②双链 DNA③特定核苷酸序列④磷酸二酯键⑤黏 性末端⑥平⑦DNA连接酶⑧双链 DNA片段⑨磷酸二酯键⑩分子运输车1质粒、入噬菌体 的衍生物和动植物病毒 2.①限制酶切割位点②自我复制③同步复制④遗传标记基因⑤鉴 定和选择3.①目的基因的获取②基因表达载体的构建③将目的基因导入受体细胞④目的基 因的检测与鉴定 4.①从基因文库中获取目的基因②利用 PCR技术扩增目的基因③通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成④核心⑤目的基因⑥启动子⑦终止子⑧标记基因⑨启动子 ①农杆菌转化法②显微注射法③ Ca2+④感受态细胞⑤DNA分子杂交⑥分子杂交技术⑦抗 原-抗体杂交⑧个体生物学水平 【课堂探究】走得欢一一探索成长快乐。 、DNA重组技术的基本工具 1.分析回答下列问题： (1 )从噬菌体侵染细菌的实验来看，细菌等原核生物容易受到自然界外源 DNA的入侵，但 这类原核生物没有绝灭，其保护机制是 ① 。 限制酶不能任意切割 DNA分子的原因是 ① 。 已知限制性内切酶I的识别序列和切点是 -G「GATCC-请画出该酶切割 GGATCC 所 产生的黏性末端。 ① CCTAGG 为什么不能把单独的 DNA片段直接导入受体细胞？ _① 。如果选择的载体没有限制酶切割位点，能否制作出重组DNA ② 。 为什么不能把单独的 DNA片段直接导入受体细胞？ _ ① 。如果选择的载体没有限制酶切割位点，能否 制作出重组DNA ② 。 能否选用从霍乱弧菌中分离出来的质粒做载体？ ① 。 我们用肉眼不能直接观察到载体进入受体细胞，那如何鉴 定呢？ ① 二、基因工程的基本操作程序 完成基因工程的基本操作流程图，并回答问题： 复制原点 抗生素基因 DNA 1 限制酶切割、 一定大小范围 DNA PCR 生物材料 基因文库包括基因组文库］c③ a① cDNA 人工合成 2.比较: DNA连接酶 DNA聚合酶 作用对象 连接 ① DNA :连接 ② DNA 作用部位 将DNA双链上 ③个缺口连接起来 将④个核苷酸加到已存在的核酸片段上 模板 ⑤ ⑥ 共同点 ⑦ 3.思考并回答问题: 获取目的基因 d④ 得到转基因生物e⑤ 得到转基因生物 e⑤ (1 )填写图中a?e的内容。 (2)PCR过