FACAria流式细胞仪操作程序.docxVIP

、 准备工作 1， 清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。 1） 用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。再用 干棉签擦干。 2） 5ml 注射器吸超纯水，清洗缝隙。用滤纸先吸水，再用干 棉签擦干。 2， 鞘液桶加液 喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。用滤纸吸干水 分，晾干。 二、 开机启动 启动电脑，密码 BDIS,点开软件，无密码 2， 机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。 液流启动： Cytometer FiuidSetup 1 ） 气路（透明管）、液路（蓝色管） ,从乙醇桶上拔下,插到 鞘液桶 2） 闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置,旋转至 12 点方向 3） 取下闭合喷嘴 4） 将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。 喷嘴压力切换： 菜单栏中 Sort---SortSetup 70um （选 择当前使用的喷嘴大小） 液流调整： 点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。查看是否都处于正常 状态： 1） 打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。如果偏离，拧 开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。 2） 查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变 化，用棉签擦拭偏转板上方 3） 查 看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调 整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。 4） 机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置， 如果看到激光射出，则正常。然后关闭主机箱外盖。 调整液流：通过调整振幅来实现。 1） 振幅Ampl,数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连 续液流。 2） 频率 Freg ，一般不动。 3） Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。100um时， 为 10, 、 11 、 12。 4） 当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到 确定值的框内（前面） 。 5） 点击 StreamSpot ，锁死数值，保持液流稳定。 Dropl :实际值和确定值，变化幅度保持在 10以内。 Gap：实际值和确定值，变化幅度保持 3以内。此视为稳定 液流。 三、 手动调补偿： 样品：Negative （双阴管），FITC（单阳），PE（单阳）‘Sample FITC,PE 双阳） 1， Browser 中：建立文件夹（单击 folder 图标） 建立文件（单击experiments图标）,出现CST新窗口，选 择 keepcurrentcytomotersetting 建立样本， 单击注 射器图标，出现 spcimen 点开下面的 +号，出现 Tube， 点成绿色。 以上文件最好都改名，分别右击英文， raname。 2， Inspect 对话框中看参数， Cytometer 中调参数。 在电压Parament中：FSC, SSC选择线性，即lingeage , 即不打勾。其他对数 log ，即打勾。 3， Inspect 中 lables ，改标签名称， egCD3-FITC,CD4-PE。 4， 上 ddH2O， Flowrate ： 11。 5， 上样品 Negtive （双阴），Flowrate 只要在 1/5Fred （说 明Fred单位为kHZ所以乘以1000除以5）。 画散点图两个，分别选择标识。图一：横坐标 FSC纵坐 标SSC图二，横坐标 CD4-FITC,纵坐标 CD8-PE 图一，调节 FSC，SSC的 电压，在 Cytometer 中 parameter 里。使得样品出现在中央位置。 图二，调节FITC，PE的电压，使得散点落在左下侧里。 完成收样后，在图一画门。在图二右击 showpopulation ， 点击 P1,再右击 showpopulati on hierarchy 显示门的关系， 再十字象限画门。 上样品FITC单阳管。调补偿。在AcquisitionDashboard 中选择 nexttube ，在 load 样品。不可选择 newtube。 调补偿。在PE-X%FITC X上调数字，使得散点图落下。 同理，上PE单阳。 如果双阴跑出横纵坐标以外， 可以自动或者手动调整负轴。 Automatic 自动,则单击 Inspector ,选 PotPlot ,在 BiexponentialDisplay 中把 XAxis，YAxis，打勾，使负值 轴显示。 Manual 手动,打勾,调数值。 上双阳。 事后调补偿。 若复制到当前文件夹。在 Browser 的当前 tube 中右击 Cytometer , 选 择 copyspectraloverlap , 选 择 Pastspectraloverlap 在总 experiment 。 若复制到其他文件夹。在 Browser 的 experiment 在