Ngb和HIF-1α在牦牛与黄牛不同脑组织表达与分布的比较研究.pdfVIP

Ngb 和HIF-1α在牦牛与黄牛不同脑组织表达与分布的比较研究 摘 要 脊椎动物中枢神经系统对低氧具有高度的敏感性，作为对低氧环境具有长期 适应性的物种——牦牛(Bosgrunniens)，其中枢神经系统，特别是脑，也必然有 其特殊 的适应机制 。脑 红蛋 白(Neuroglobin, Ngb) 和缺氧诱导 因子 -1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)，是两种已被证实与机体高海拔缺氧适应 相关的调节蛋白，主要在脊椎动物神经系统中高表达，并且，已有研究发现在缺 血缺氧性脑损伤中，HIF-1α可促进Ngb 生成。目前，对于高寒低氧环境下牦牛 不同脑组织中Ngb 和HIF-1α的表达与分布特征仍不清楚。因此，为深入探究牦 牛不同脑组织在适应高寒低氧环境过程中Ngb和HIF-1α的表达及相互作用关系， 本研究利用qRT-PCR、Westernblot 及免疫组织化学技术，对牦牛脑不同区域组 织中Ngb 和HIF-1α的表达与分布特征进行研究，同时与平原黄牛作比较。具体 研究结果如下： 1）在牦牛和黄牛端脑不同组织中，Ngb 和HIF-1αmRNA 和蛋白均有不同程 度的阳性表达，且表达趋势基本一致，其中，顶叶皮质Ngb 和HIF-1αmRNA 和 蛋白表达量最高(P 0.05)。相比较而言，牦牛端脑不同组织NgbmRNA 表达量 均高于黄牛；HIF-1αmRNA 的表达量除在顶叶皮质中牦牛表达量较黄牛高外， 其余区域与黄牛基本一致。Ngb 蛋白在牦牛端脑的表达量除梨状叶外其余区域均 高于黄牛；HIF-1α蛋白在黄牛的表达量除扣带回外其余区域均高于牦牛。免疫组 织化学结果显示，Ngb 和HIF-1α在牦牛和黄牛端脑不同区域的分布特征相似， 主要位于端脑大部分区域的神经元胞质或少部分神经胶质细胞中，阴性对照均无 表达。 2）在牦牛和黄牛间脑不同组织中，Ngb 和HIF-1αmRNA 与蛋白均有不同程 度的阳性表达，且表达量趋势基本一致，其中，牦牛间脑Ngb和HIF-1αmRNA 均在脑垂体和松果体中表达量最高(P 0.05)；黄牛间脑Ngb和HIF-1αmRNA 均 在脑垂体中表达量最高(P 0.05)。相比较而言，Ngb 与HIF-1αmRNA 在牦牛脑 垂体与松果体中的表达量较黄牛高，其余区域表达量基本一致。牦牛间脑Ngb 蛋白在脑垂体和下丘脑表达量最高(P 0.05)，HIF-1α蛋白仅在脑垂体表达量最高 (P 0.05)；黄牛脑垂体中Ngb 和HIF-1α蛋白的表达量最高(P 0.05)。相比较而 言，Ngb 和HIF-1α蛋白在牦牛间脑各区域表达量均高于黄牛。免疫组织化学结 I 甘肃农业大学2020 届硕士学位论文 果显示，Ngb 和HIF-1α在牦牛和黄牛间脑不同区域的分布特征相似，主要位于 间脑各区域的神经元胞质中，阴性对照均无表达。 3）在牦牛和黄牛菱脑不同组织中，Ngb 和HIF-1αmRNA 和蛋白均有不同程 度的阳性表达，且表达趋势基本一致，其中，牦牛菱脑Ngb 和HIF-1αmRNA 和 蛋白均在蚓前叶表达量最高(P 0.05)；黄牛菱脑Ngb mRNA 和蛋白仅在蚓前叶 表达量最高(P 0.05)，而HIF-1αmRNA 和蛋白在蚓前叶与小脑半球皮质表达量 均为最高(P 0.05)。相比较而言，NgbmRNA 在牦牛小脑半球白质中的表达量较 黄牛低，其余区域表达量基本一致；HIF-1αmRNA 在牦牛小脑半球白质、蚓后 叶和蚓小叶中的表达量较黄牛低，其余区域表达量基本一致。Ngb 蛋白在牦牛小 脑半球白质和蚓小叶中的表达量较黄牛低，其余区域表达量牦牛高于黄牛， HIF-1α蛋白在牦牛菱脑中的表达量均高于黄牛。免疫组织化学结果表明，Ngb 和 HIF-1α在牦牛和黄牛菱脑不同区域的分布特征相似，主要位于神经元胞质，阴性 对照均无表达。 4）牦牛端脑、间脑、菱脑大部分区域的Ngb 和HIF-1α在基因及蛋白水平的 表达趋势一致，呈正相关，但在个别区域，存在基因和蛋白表达不一致的现象； 而黄牛端脑、间脑、菱脑各区域组织中Ngb 和HIF-1α在基因和蛋白水平的表达 趋势均一致。 上述研究结果表明，牦牛和黄牛不同脑组织中，均有Ngb 和HIF-1α基因与 蛋白不同程度的阳性表达，说明了二者进化的保守性。其中，Ngb 和H