DNA甲基化参与调控马铃薯响应干旱胁迫的表观遗传学研究.pdfVIP

DNA 甲基化参与调控马铃薯响应干旱胁迫的表观遗传学研究 摘 要 干旱对植株的正常生长、发育、产量和种子品质造成了严重影响。植物干旱胁 迫反应的分子机制包括转录前表观遗传调控以及转录后激素、转录调节因子和干旱 响应基因等信号分子的参与。表观遗传修饰 DNA 甲基化是最早发现且研究最为深 入，植物受到水分胁迫时，会通过DNA 甲基化做出快速反应以帮助其应对干旱胁迫。 马铃薯在块茎形成及膨大期间的水分缺失严重影响了马铃薯植株的正常生长发育， 有关DNA 甲基化参与调控马铃薯干旱胁迫下的表观遗传研究甚少。因此，本文先以 5 个抗旱性不同马铃薯品种为试验材料，对其在甘露醇模拟干旱胁迫、DNA 甲基化 抑制剂处理和共同处理下的表型性状以及生理特性分析，接着对干旱和DNA 甲基化 抑制剂响应极端的 2 个品种进行转录组分析，最后对马铃薯在响应干旱胁迫时受 DNA 甲基化调控的马铃薯GST 基因家族鉴定与分析，研究结果如下： 1. 以马铃薯品种大西洋、费乌瑞它、C119 、C16 和青薯 9 号为试验材料，以 MS 培养基为对照以及分别添加 200 mmol L-1 甘露醇、60 μmol L-1 甲基化抑制剂 (5-azadC) 和60 μmol L-1 甲基化抑制剂+200 mmol L-1 甘露醇，处理24 d 后对试管苗 表型性状和生理指标进行综合分析。结果发现，不同品种马铃薯对甘露醇和甲基化 抑制剂响应程度趋势类似。在干旱和DNA 甲基化抑制剂分别处理下，马铃薯植株干 鲜重、株高、叶片数和叶绿素含量均显著减少 (P0.05) ，SOD、POD 、CAT 活性和 Pro 、MDA 含量均显著增加 (P0.05) ，而分枝数、根长、平均根粗均无明显变化， 表明马铃薯不同性状指标在响应干旱胁迫和DNA 去甲基化时，受到的调控通路可能 不同。进一步比较干旱胁迫和DNA 去甲基化共同处理与分别处理下表型性状和生理 指标的差异发现，共同处理使马铃薯植株表型性状受到进一步抑制，同时活化了 SOD、POD 、CAT ，并且使Pro 、MDA 含量增加，表明马铃薯在响应干旱胁迫过程 中，部分表型的形成与DNA 甲基化调控相关。这将为深入研究马铃薯干旱胁迫响应 与表观遗传学之间的调控网络通路提供初步的理论基础。 2. 对甘露醇模拟干旱和 5-azadC 处理下，抗旱性不同的2 个马铃薯品种进行比 较转录学分析，以Fold-change2 和校正后P0.01 进行差异表达基因 (DEG) 的筛选。 GO 富集分析发现两种处理都共同著富集到氧化应激和碳水化合物代谢过程相关的 GO term 。说明不同耐旱性马铃薯在响应干旱胁迫时，与这些GO term 相关基因受 DNA 去甲基化调控。同时对既响应干旱又响应DNA 去甲基化的1345 个DEGS 进行 KEGG 功能富集，结果显示，与植物抗旱相关的通路有植物MAPK 信号途径、植物 激素信号转导途径、植物谷胱甘肽代谢通路、糖酵解与糖异生和磷酸肌醇代谢通路。 说明这些通路相关基因对导致大西洋和青薯9 号马铃薯品种响应干旱的差异受DNA I 甘肃农业大学2020 届硕士学位论文 甲基化参与调控。同时对DEGs 启动子区域1500bp 研究表明干旱胁迫下参与植物谷 胱甘肽代谢的GST 基因通过DNA 去甲基化来降低启动子区ABRE 和CAAT-box 作 用元件的甲基化水平，进而激活该基因的表达以应对干旱胁迫。 3 ． 基于转录组分析结果，对马铃薯谷胱甘肽 S-转移酶进行全基因家族分析结 果表明，共在马铃薯全基因组中鉴定出 70 个马铃薯 GST 基因，结构域分析、多序 列比对和系统发育分析研究将这些蛋白质分成 9 个不同的亚类，各亚类中马铃薯的 基因数量最多。同时，与其他植物物种研究GST 家族一样，Tau 在马铃薯GST 基因 中也是数量最多的亚类，有53 个成员。还比较了马铃薯与拟南芥、辣椒和番茄的比 较基因组共线性图谱，共有33 个马铃薯GST