PEG胁迫下一氧化氮对紫花苜蓿幼苗内源激素及其microRNA调控机理的研究.pdfVIP

PEG 胁迫下一氧化氮对紫花苜蓿幼苗内源激素及其microRNA 调控机理的研究 摘 要 紫花苜蓿（Medicago sativa L.)是一类优质的豆科牧草，其产量高，营养丰富，是世界 上栽培历史悠久、种植面积最广泛的牧草作物，其根系粗壮，能够与根瘤菌共生，在改善 生态环境和固氮培土方面发挥着重要的作用。但长期以来，对西北干旱和半干旱地区而言， 缺水严重限制了紫花苜蓿的规模化种植，这与日益发展的农牧产业化体系不相适应，因此， 增强紫花苜蓿的抗旱性对于推动西北地区产业化发展具有至关重要的作用。一氧化氮 （Nitric oxide ，NO ）是一种新型的气态信号分子，在植物的生长发育及逆境胁迫中发挥着 重要的作用。本试验以紫花苜蓿幼苗为材料，采用聚乙二醇 （PEG-6000 ）模拟干旱胁迫， 通过外源喷施一氧化氮释放剂硝普钠（Sodium nitroprusside ，SNP ）和清除剂cPTIO（carboxy- PTIO ），应用生理生化理论、small RNA 测序技术和生物信息学方法，分析PEG 胁迫下NO 对紫花苜蓿叶片形态特征、4 种内源激素 （ABA ，IAA ，SA 和GA ）含量变化及miRNA 3 调控的影响，研究PEG 胁迫下NO 对紫花苜蓿幼苗内源激素及其miRNA 的调控机理。研 究结果如下： （1）通过对紫花苜蓿叶片形态的分析表明，内源NO 诱导气孔关闭的能力比外源NO 更为显著，PEG 胁迫下叶片的气孔长度和宽度减小，其气孔导度达到最小值；外源NO 清 除剂会使叶片的气孔长度和宽度增加，其气孔导度高于外源NO 处理，表明苜蓿叶片中内 源NO 对气孔关闭有显著的促进作用。 NO 对提高叶片组织的抗旱性起着非常重要的作用， 随胁迫时间的延长，外源施加NO 会使叶片的海绵组织厚度增加，栅海比降低；当清除叶 片中的NO ，栅栏组织厚度增加，栅海比达到最大值，因此，NO 在一定程度上可通过增加 叶片组织的栅栏比来缓解干旱胁迫造成的损伤。 （2 ）PEG 胁迫下对紫花苜蓿叶片和根中4 种内源激素的分析表明，NO 可通过诱导紫 花苜蓿中IAA、ABA 、GA3 和SA 四种激素的代谢水平及根中的相互转化调控植物的生长 与抗逆性，尤其ABA 和SA 在叶片中的调节作用更为显著。1）PEG 胁迫下外源喷施NO 能促进叶片和根中NO 含量的增加，其清除剂明显降低了叶片的NO 含量；2 ）随着处理时 间的延长，叶片和根中的ABA 和SA 含量逐渐增加，而根中ABA 和SA 含量的增加较晚 于叶片。在胁迫第8 d ，叶中外源NO 处理的ABA 含量比SA 高6.68 倍，而喷施NO 清除 剂的SA 含量比ABA 低77.22%，并且叶中外源NO 处理的ABA 含量明显高于根中；3 ） NO 会在短期内诱导叶片和根中IAA 和GA3 含量增加，在胁迫第4 d ，叶片中外源NO 处 I 甘肃农业大学2020 届硕士毕业论文 理的IAA 含量高于其清除剂 1.63 倍；而叶片和根中的GA3 含量在第2 d 达到最大值后逐 渐降低。 （3 ）miRNA 的差异表达与分析结果显示：PEG 胁迫下内源NO 可通过富集更多与胁 迫相关的生物学过程和分子功能来调控植物生长发育。在紫花苜蓿叶片的4 个处理中共鉴 定出91 个已知miRNA 和176 个未知miRNA ，它们分别来自47 和61 个miRNA 家族；在 PEG 处理中鉴定了31 个差异表达的miRNA ，在干旱胁迫下大多上调表达；PEG+cPTIO 处 理共鉴定了 12 个差异表达的 miRNA ，它们大部分下调表达，其中，mtr-miR5213-5p 在 PEG+cPTIO 处理中表达量最高并下调表达。对4 个处理进行分析，从中筛选出 15 个共同 表达的差异表达miRNA ，对miRNA 进行靶基因功能预测，GO 富集和KEGG 途径分析显 示紫花苜蓿叶片中内源NO 可参与氧化应激反应、激素和苯丙烷类代谢相关的生物过程及 分子功能来响应干旱胁迫。 转录组与miRNA 的联合分析显示PEG 胁迫下清除苜蓿叶片中NO 会使部分miRNA 下调表达。而 miR2118 上调表达并参与紫花苜蓿