常用的HIV诊断方法.pdf

HIV/AIDS 艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是 假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。 HIV 检测是诊断 HIV 感染及艾滋病的重要 实验室依据之一， 要知道是否感染了 HIV 可以通过检测病毒的抗体、 抗原、 核酸或通过病毒 培养来确定。 常用于诊断 HIV/AIDS 的方法是 HIV 抗体检测，它是诊断 HIV/AIDS 的主要指标， 也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的 HIV 感染诊断方法。 为了最大限度地保证诊断结 果准确， HIV 诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再 用特异性强的确认试剂进行确认。检测 HIV 抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验 (ELISA) 、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法 (WB)、放射免疫沉淀试 验(RIP) 、间接免疫荧光试验 (IFA) 等。一般先用 ELISA 做初筛试验 ; 如果阳性，再用蛋白印 迹法来确认。以下介绍一下较常用的 HIV 抗体测定的方法。 一．初筛试验方法 1 ．酶联免疫吸附试验（ ELISA ） 酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在 HIV 抗体的测定中有四种 模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1 ）间接法：将 HIV 抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记 抗人免疫球蛋白（ IgG ），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图 1） 2 ）双抗原夹心法：将 HIV 抗原固定于微孔板上 , 然后加入待测标本，清洗后加入酶标 记的 HIV 抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图 2 ） 3 ）捕获法： 将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上， 然后加入待测标本 , 清洗后加入酶标记的 HIV 抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图 3 ） 4 ）竞争法：：将 HIV 抗原固定于微孔板上 , 然后同时加入待测标本和一定数量的酶标 HIV 抗体，如果标本中有 HIV 抗体 , 即与加入的酶标 HIV 抗体竞争结合固定在微孔板上的抗 原，标本中 HIV 抗体量越多， 结合在固相上的酶标抗体就愈少， 清洗后加入底物。 结果判断 与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图 4） 2 ．凝集试验： 凝集试验是一种快速的 HIV 血清抗体初筛检测方法。将 HIV 抗原吸附在乳胶颗粒、凝 胶颗粒或其他载体颗粒上， 标本中的 HIV 抗体将与载体的 HIV 抗原结合， 即出现肉眼可见的 颗粒凝集现象。 另一种方法是红细胞凝集试验， 在待测的全血标本中加入结合有 HIV 抗原的 红细胞抗体， 如标本中存在 HIV 抗体， 红细胞上的抗原和 HIV 抗体结合， 出现肉眼可见的红 细胞凝集现象。 3 ．斑点印迹（或免疫层析 / 或渗滤）试验： 斑点印迹（或免疫层析 / 或渗滤）试验是一种快速的 HIV 血清抗体初筛检测方法。一般 采用硝酸纤维素膜作固相载体， 在载体下面有吸水衬垫可吸收加入的液体。 将重组或多肽抗 原包被在载体内，加入待检血清，包被抗原和被检血清中抗体结合，用胶体金（或胶体硒） 代替底物连接在葡萄