(完整版)transwell实验原理与步骤.docVIP

一、 Transwell 小室制备 无基质胶 Transwell 小室制备 ① 包被基底膜： 用 50 mg/LMatrigel 1:8 稀释液包被 Transwell 小室底部膜的上室面， 4 ℃风干。如果需 要在下室面铺 FN 的话，可将 200 ul 枪头的尖端剪掉 ,吸取 FN 均匀涂抹在小室的下面。用 胶原（ collagen ）的话，一般配成 0.5 mg/ml ，直接用枪吸了涂在膜上。 ② 水化基底膜： 吸出培养板中残余液体，每孔加入 50ul 含 10g/LBSA 的无血清培养液， 37 ℃， 30min 。 另有 tianjin_glioma 战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的 Matrigel (3.9 ug/ul) 60- 80 μ l ( 注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好 )，置 37 ℃ 30 min Matrigel 聚合成凝胶。 有基质胶的 Transwell 小室制备 Chemicon 公司的 ECM550 系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入 300 μl 预温的无血清培养基，室温下静置 15 － 30 min ，使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。 二、制备细胞悬液 ① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿 12 － 24 h ，进一步去除血清的影响。 但这一步并 不是必须的。