高中生物必修一可溶性还原糖脂肪蛋白质鉴定 人教版.pptVIP

实验一】 生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定  【实验一】生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 【实验原理】 1、可溶性还原糖的鉴定原理 (1)生物组织中普遍存在的可溶性还原糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖, 分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原性糖 (2)用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖的存在与否。斐林试剂由质量浓 度为0.1gmL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成,三 者混合后,立即生成淡蓝色的cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的 条件下,能够生成砖红色的cu2O沉淀 (3)用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色一棕色一砖红 色(沉淀)。  2、蛋白质的鉴定原理 (1)鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂。双 缩脲试剂的成分是质量浓度为0.19mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/mL 的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(HNOc№ H-CONH2)能与铜离 子作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中 含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质都可与双缩脉试剂发生颜色反应 3.脂肪鉴定的原理: 苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色,苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 4、淀粉的鉴定:淀粉遇碘变成蓝色。  化合物 试剂 反应颜色 注意事项 还原糖 甲、乙液要现混合现 葡萄糖、果斐林试剂砖红色沉淀用、还要50-65℃水 糖、麦芽糖) 浴加热 无需加热、但A液和B 蛋白质双缩脲试剂紫色液要分开使用、先加 A液、后加B液 脂肪 苏丹染液橘黄色要用高倍显微镜观察 (苏丹Ⅳ染 液) (红色) 淀粉 碘 蓝色  实验步骤 还原糖的鉴定: 1mL斐林试剂 5065℃ 温水 苹果组织液 与苹果组织液 煮2分钟  脂肪的鉴定: 苏丹Ⅲ(或Ⅳ 染色23分钟 50%酒精 蒸馏水 先用低倍镜观察,后用高倍镜观察  显微镜下的脂肪颗粒  蛋白质的鉴定: lmL双缩脲 滴双缩脲 试剂A液 试剂B液 蛋白质2mL 观察颜色变化  实验成功的关键及注意事项】 1.实验成功的关键在于实验材料的选择 (1)可溶性还原糖的鉴定实验中,最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织 (或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的。经试验比较,颜色反应的明显 程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜 (2)脂肪的鉴定实验中,实验材料最好选用富含脂肪的种子,且徒手切片要成功 (3)蛋白质的鉴定实验,最好选用富含蛋白质的生物组织,植物材料常用的是大 豆,动物材料常用的是鸡蛋白。  注意事项】 (1)斐林试剂很不稳定,故应将组成斐林试剂的甲液(0.1gmL的NaOH溶液 和乙液(0.05g/mL的cuSo4溶液)分别配制、储存,使用时,再临时配制,将4~5 滴乙液滴入2mL甲液中,配完后立即使用。 (2)双缩脲试剂的使用,应先加试剂A(0.1g/mL的№aOH溶液),造成碱性的反应 环境,再加试剂B(0.01gmL的cuSO4溶液)。 (3)在蛋白质的鉴定实验中,若用蛋白质作实验材料,必须稀释,以免实验后粘住试 管,不易洗刷。 (4)在鉴定脂肪的实验中,若用花生种子作实验材料,必须提前浸泡3~4小时,浸泡 时间短了,不容易切片,浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易成形,染色时 间不宜过长。