蛋白质沉淀反应蛋白质的盐析作用.docx

蛋白质沉淀反应—蛋白质的盐析作用 【实验原理】 盐析现象是指—般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降， 故向其溶液中加入中性盐至一定浓度时，蛋白质即自溶液中 沉淀析出。盐析作用与两种因素有关： ①蛋白质分子被浓盐脱水 ; ②分子所带电荷被中和。 蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐析方法沉淀蛋白质 时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时又可溶解。 盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及 pH 有 关。分子量大的蛋白质 （ 如球蛋白 ）比分子量小的 （ 如清蛋白 ） 易于析出。球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出，而清蛋 白需在饱和硫酸铵溶液中才能析出。 【 试剂 】 1.鸡蛋清的氯化钠溶液 （一份鸡蛋清加 10 份的 0.9%氯化 钠溶液 ） 2. 固体硫酸铵 3.10%氢氧化钠溶液 4..1% 硫酸铜溶液 【实验操作】 1.取鸡蛋清氯化钠溶液约 2ml 于 试管 中，加入硫酸铵粉 末，至硫酸铵饱和不再溶解为止，此时溶液颜色为乳白色， 用滤纸过滤 2. 取滤液做双缩脲反应，检查滤液中有无蛋白质存在。 蛋白质沉淀用 1ml 蒸馏 水溶解后作双缩脲反应，证明盐 析的蛋白质重新溶解于水而未引起变性。试管编号 1234567 磷酸溶液的浓度 (mol/L)124681012 磷酸溶液的加入量 (滴)1 1 1 1111 混合溶液的 PH值543.532.521.5 盐析时 (NH4)2SO4 饱和溶液的用量 (滴)1 0766666