微生物技术 微生物技术 抗体的研究进展及其应用.ppt

抗体的研究进展及其应用 苏州大学 张学光 抗体（Antibody,Ab）是血液和组织液中的一类糖蛋白，以γ球蛋白的形式存在血清中，也是B淋巴细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的体液免疫应答效应分子，也被称之免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）。 抗体的基本结构是一个Y型的多肽链，由两条完全相同的重链和轻链组成。 抗体的功能片段 重链和轻链的氨基酸顺序分析发现，在氨基端部分的顺序表现很大的变化，称之谓可变区（V区），这个区域也是与抗原结合的部位（Fab），主要功能是与相应抗原物质识别有关，并决定抗体识别的特异性； 羧基端部分的氨基酸顺序则相对恒定，称之谓恒区（C区），其片段为FC，该片段决定抗体本身的抗原性和抗体的同种型（IgM、IgD、IgG、IgA和IgE），并有以下几个生物学功能： 抗体作为一种有效的生物制剂，近100年以来，在医学和生物学的各个领域中占有十分引人瞩目的地位。 被动的抗体治疗 19世纪末，人们发现免疫动物的血清能预防及治疗某些感染性疾病。 20世纪20-30年代初达到全盛时期，有一系列的抗血清制剂用于治疗肺炎球菌肺炎、双球菌脑膜炎、白喉、猩红热、麻疹。 大多抗体制剂来源于兔和马的免疫血清，又称为血清治疗。虽然血清治疗在临床上的疗效是肯定的，但异源血清的应用可引起严重的毒副作用。 20世纪40年代，甚至迄今，抗血清制剂继续用于毒素介导的疾病，例如对付毒虫咬伤，抗毒素更是首选药物，某些血液系统疾病（再生障碍性贫血）以及某些抗移植排斥反应。 杂交瘤技术的创立和单克隆抗体的研制及运用 Milstein和Kohler巧妙地提出将抗体生成细胞和肿瘤细胞融合而构建能分泌结构均一的特异性抗体分子，这为抗体的运用和产业化带来革命性突破。单抗作为临床诊断、治疗、预防以及基础理论研究的新型制剂，已日益显示出重要的作用和广泛的应用前景。 HAMA 反应 由于人、鼠之间遗传学的差异，在人体的使用鼠源单抗，均在二周左右会产生人抗鼠Ig，这样会迅速降低单抗的治疗效果，同时HAMA可在人体内产生相应的变态反应，因此限制了鼠源性单抗在临床上的反复长期使用。 基因工程抗体 将制备单抗的细胞工程技术与生产重组蛋白的基因工程、蛋白质工程技术相结合，改选鼠源性单抗，使之人源化，形成基因工程抗体。 基因工程抗体构建灵活，既能减少抗体中的鼠源成份降低免疫原性，延长其体内半衰期，又可将抗体的部分片段与其它功能分子相连接，使抗体除了与抗源结合，还能发挥其它效应。 基因工程抗体的分类 嵌合抗体（chimeric antibody） 由在基因水平上连接的小鼠抗体V区及人抗体C区组成。 人源化抗体,又称重构型抗体、改型抗体（reshaped antibody）或CDR移植抗体（CDR grafting antibody） 通过置换三个发夹状环的鼠抗体超变区（又称互补决定区，CDR），使构成抗原结合部位的轻重链各3个CDR区是鼠源的，其余均为人源的。该抗体对人的免疫原性几乎没有了，但与抗原的亲和力有所下降，只能达到原先鼠源单抗的33-55%。 完整的人抗体（fully human antibody） 这是由人淋巴细胞产生的理想的抗体分子，不包含任何鼠源成分。此种抗体不仅完全避免了HAMA的产生，而且特异性、亲和力不受影响。尽管利用人细胞制备单抗的工艺尚不成熟，但人B细胞体外免疫技术的发展、抗体库技术、体外亲和力成熟及转基因动物的研究等，已使生产完整的人抗体成为可能。 C区的选择 不同的免疫球蛋白亚型与Fc受体及补体作用后激活细胞溶解等免疫反应的能力是不同的。 抗体分子片段 小分子抗体片段（antibody fragment）具有免疫原性低，分子量小，半衰期短，易于渗入目标组织及清除，不与Fc受体阳性细胞相结合，毒副作用小等优点，并便于与一些功能性分子融合，发展其他效应，如与放射性同位素、化学药物、酶、生物毒素、病毒、脂质体、生物传感器等相连接。 单区抗体又称单域抗体 ( single domain antibody,V domain ) 单区抗体由单个VH功能区构成，制备方法简便。但单区抗体的亲和力较完整抗体下降了一个数量级，另外VH暴露了原先和VL结合的疏水性表面，影响了其特异性，VH仍需进一步改造。 单链抗体（single chain Fv，scFv） scFv由VH和VL中间联以含14-15个氨基酸残基的小肽组成，较稳定，但亲和力比完整抗体及Fab低，可能与肽连接物干扰有关。 scFv经常与一些功能性分子（如IgG1的CH3、人C4结合蛋白的C末端片段、IL-12、IL-2、葡萄球菌蛋白A的BT2、核糖核酸酶S的S肽及