微生物育种技术 项目二 工业菌种的纯培养技术、单元六 工业菌种的分离与纯培养技术、微生物育种技术 单元六 项目 二.ppt

将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生长现象。 三、具体接种方法 接种工具：常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 图－6 斜面接种法-1 ① 左手平托两支试管，拇指压住两支试管。外侧是菌种试管，内侧是待接种的空白斜面(两支试管的斜面同时向上) 。右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 ② 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 ③ 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指、无名指和手掌将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。 1 2 3 ④ 将已灼烧过的接种环伸入菌种试管内。先冷却，而后再用环挑取少许菌种，将接种环抽出并迅速伸入待接种试管底部，在斜面上由底部向上划线。抽出接种环，塞上棉塞将试管插在试管架上，最后再次烧红接种环，则接种完毕。 4 5 6 7 8 斜面接种法-1 斜面接种 （1）用左手大姆指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种和斜面试管，右手拧松棉塞、不取下。 （2）右手拿接种环，在火焰上烧灼灭菌，特别是箍处。 斜面接种法-2 （3）火焰边取下两个棉塞，不能放下；烧灼管口一周。 （4）将接种环伸入试管内，冷却后，轻轻挑取少量菌体，立即将接种环抽出。 （6）抽出接种环后，烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。 （5）火焰旁将沾有菌种的接种环迅速伸到斜面培养基的底部，由里向外画蛇形细线，线要画得细些。 液体接种和穿刺接种 液体接种法(从斜面菌种接入培养液)：用接种环挑取斜面菌种送入培养液中，使环在液体表面与管壁接触轻轻研磨，将环上的菌种全部洗入培养液中，取出接种环塞上棉塞。将试管轻轻撞击手掌使菌体在培养液中均匀分布。最后将接种环烧红灭菌。 穿刺接种法(从斜面菌种接入(半)固体培养基)：用接种针经火焰灭菌后，挑取少量菌种，垂直地穿入试管固体培养基中心至底部，然后穿刺线缓慢将针抽出，塞上棉塞。烧红接种针灭菌，则接种完毕。 四、细菌的生长现象 （一）在液体培养基中的生长现象 浑浊生长、菌膜生长、沉淀生长 （二）在固体培养基中的生长现象 长出菌落 菌苔生长 （三）在半固体培养基上的生长现象 沿穿刺线生长 沿穿刺线扩散生长 1、细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌落与菌苔 菌落 菌苔 EMB琼脂平板上大肠菌菌落具有金属光泽 SS琼脂平板上大肠杆菌为粉红菌落 光滑型菌落 粗糙型菌落 2、细菌在液体培养基中的生长现象 均匀混浊：大多数细菌 沉淀：少数链状排列的细菌。如链球菌 菌膜：结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌等专性需氧菌呈表面生长。 细菌在液体培养基中的生长现象 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 3、细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌： 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌： 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 细菌在半固体培养基中的生长现象 有动力 现象 无动力 现象 单元六 工业菌种分离和纯培养技术 项目二 工业微生物菌种的培养方法 ① 从少量培养→大规模培养 ② 从浅层培养→厚层（固体制曲）或深层（液体搅拌）培养 ③ 从固体培养→液体培养 ④ 从静止式液体培养→通气搅拌式的液体培养 ⑤ 从单批培养→连续培养→多级连续培养 ⑥ 从分散的微生物细胞→固定化的细胞集团 ⑦ 从微生物细胞→动、植物细胞大规模培养； ⑧ 从野生型菌种→突变株、遗传工程菌株； ⑨ 从单菌发酵→多菌发酵； ⑩ 从低密度培养→高密度培养； ? 从人工控制的发酵罐→到多传感器、计算机在线控制的自动化发酵罐等。 微生物培养技术的发展特点： 任务一、实验室培养法 （一）固体培养法 （二）液体培养法 好氧菌的固体培养 厌氧菌的固体培养 好氧菌的液体培养 厌氧菌的液体培养 （一）实验室固体培养法 1. 好氧菌的固体培养 试管斜面、培养皿平板、茄子瓶 2. 厌氧菌的固体培养 实验室中 培养厌氧菌 特殊的培养装置或器皿 配制特殊的培养基 六种营养要素 加入还原剂和氧化还原势的指示剂 ①高层琼脂柱：培养基中加入还原剂，装入试管中灭菌后，只有表层有一些溶解氧，越是深层，其氧化还原电位势越低，有利于厌氧菌的生长。如韦荣氏管（Veillon tube）：长25cm，内径1cm，两端可用橡皮塞封闭的玻璃管。 ②厌氧培养皿： Brewer皿：利用凹形皿盖制造狭窄空间，加上还原性培养基达到厌氧环境。 Spray或Bray皿：利用焦性没食子酸+NaOH反应造成无氧环境。 ③