【培训课件-临床色谱质谱检验技术】_色谱质谱技术的其他常见应用（一）.pptVIP

氨基酸在溶液中受溶液pH的影响存在着下列平衡： pHpI pH=pI pHpI 偶极离子——净电荷为零——在电场中不移动，此时溶液的pH值称为等电点（pI） 信息及文献检索 分析测定方法 样品制备包括采集、离心、存储和除蛋白。 采集：确保被试者没有服用任何影响氨基酸测定的药物，同时采血在早晨空腹的情况下进行，以免饮食因素对结果产生影响。 离心和存储：采集后的标本，应尽快离心，离心后放在低于-18℃的条件下存储。（为了防止蛋白水解，离心之后不宜立即除去蛋白） 除蛋白： 常见有酸沉淀、有机溶液沉淀、超滤、高速离心和透析等。 样品制备 除蛋白： 酸沉淀：主要使用磺基水杨酸（SSA）沉淀蛋白 有机溶液沉淀 超滤和高速离心 透析 样品制备 蛋白质和多肽中氨基酸的分析： 酸水解 较多采用盐酸水解（6mol/L HCL，110℃，20～24h），加入保护剂，减少氨基酸的损失（天冬酰胺和谷氨酰胺变成天冬氨酸和谷氨酸，半胱氨酸变成为胱氨酸） 碱水解 多用于色氨酸的测定，主要使用氢氧化钠或氢氧化钾 酶水解 用于化学水解敏感的氨基酸的测定，如天冬酰胺和谷氨酰胺，需较长的反应时间 微波消解 样品制备 衍生化离子交换色谱法 衍生化离子交换色谱法（柱后衍生） 分析原理：基于阳离子交换树脂分离-柱后茚三酮衍生化分光光度检测方法。 所有的氨基酸在低pH值的条件下（pH为2.2）都带有正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附。 其中吸附程度：碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。 被洗脱下来的氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应。 天冬氨酸的pI值为2.98 衍生化离子交换色谱法 茚三酮反应原理 脯氨酸与茚三酮反应：波长440nm检测 其它氨基酸与茚三酮反应：波长570nm检测 衍生化离子交换色谱法 Confidentiality Label Confidentiality Label 色谱法：利用混合物中各物质间在固定相和流动相间分配系数的差异，当溶质在两相间做相对移动时，各物质在两相间进行多次分配，从而使各组分得到分离。 色谱分配系数：在一定温度下，处于平衡状态时，被分离组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比。 * 检测器为：FID-氢火焰离子化检测器 * 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。当蛋白质这两个稳定因素受溶液温度、pH值、介电常数和离子强度等参数影响时蛋白质便容易凝集析出。 某一溶质溶解在两个互不相溶的液相中，若溶质在两相中的分子形态相同，在一定的温度下，两相接触达到平衡后，溶质在两相中的平衡浓度比值为一常数，且不随溶质浓度的变化而改变。 * 按Fischer投影式：羧基在上方，氨基在左侧的是L型，在右侧的是D型。 费歇尔以甘油醛为标准，以D/L命名与甘油醛联系的旋光性的化合物。 hydrophobic group-疏水基 hydrophilic group-亲水基 * 按氨基酸具有的酸性和碱性基团可分为：中性氨基酸、酸性氨基酸（天冬氨酸、谷氨酸）和碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸） * * 缓冲液A 缓冲液B 缓冲液C 再生液 样品稀释液 pH值 2.85 4.50 3.30 2.20 当量浓度 0.12 0.12 1.40 0.30 0.15 锂柠檬酸盐 14.1g 14.1g 18.8g 14.1g 氯化锂 50.7g LioH 12.8g 柠檬酸 7.00g 7.00g 乙烯甘氨酸 20mL 甲醇 50mL HCL(37%) 9mL 6mL 10mL 15mL 总体积 1L 1L 1L 1L 1L * * 根据氮原子上连接的烃基数量，一个是伯，两个是仲，三个是叔。 * * 第六章 色谱质谱技术的其他常见应用 《临床色谱质谱检验技术》 本章教学要求 色谱技术在临床实验室中的应用 《临床色谱质谱检验技术》 主要内容 小结与思考 目的 回顾之前所学色谱质谱知识，与实践相结合； 熟悉和了解色谱质谱技术在临床实验室中的其他常见应用情况。 第六章教学要求 第六章教学要求 目标 熟悉： 电感耦合等离子体质谱技术应用于元素分析 三重四级杆技术应用于遗传代谢性疾病检测 了解： 高效液相色谱技术应用于氨基酸检测 液相色谱技术应用于血药浓度检测 毛细管电泳技术应用与地中海贫血检测 基质辅助激光解析-飞行时间质谱技术应用于微生物鉴定 第六章教学要求 教学形式及学时 教学形成：理论教学 学时：3 高效液相色谱技术应用于氨基酸检测 电感耦合等离子体质谱技术应用于元素分析 三重四级杆技术应用于遗传代谢性疾病检测 《临床色谱质谱检验技术》 色谱技术在临床实验室中的应用 回顾 什么是色