【培训课件-临床色谱质谱检验技术】_第四章气相色谱质谱联用技术（四）.pptVIP

*  * 第四章 气相色谱-质谱联用技术 《临床色谱质谱检验技术》 一、复习 二、气相色谱质谱方法建立（三） 主要内容 《临床色谱质谱检验技术》 三、气相色谱质谱的临床应用 四、小结与思考 一、复习 《临床色谱质谱检验技术》 气相色谱建立包括几部分？ 气路系统 进样口类型 分离系统 复习 二、气相色谱质谱方法建立（三） 《临床色谱质谱检验技术》 柱分离系统是色谱分析的心脏部分，其作用就是把样品中的各个组分分离开来。 分离系统条件选择 载气流速选择 进样量选择 色谱柱的选择 气相色谱方法-分离系统 固定液液膜厚度 柱长 固定液 柱温 载气流速选择 检测器 载气 柱效 柱效最高处的流速为最佳流速，实际流速稍大于最佳流速 u的选择 进样量选择 进样量 柱效 进样量过大，使色谱柱超载，柱效急剧下降，峰形变宽 检测器 进样量过大，峰高或峰面积与进样量的线性关系被破坏 进样量应控制在柱容量允许范围 及检测器线性检测范围之内 色谱柱的选择 毛细管气相色谱柱是首选 固定相种类是最重要的和最有效的影响因素。 色谱柱柱温选择 改变柱温产生的影响 柱效 增加柱温可加快气相、液相的传质速率，有利于降低塔板高度，改善柱效；但同时又会加剧纵向扩散，从而导致柱效下降 分离度 柱温升高，分离度下降。 分析时间 降低柱温，分析时间增加 色谱柱柱温选择原则 柱温应控制在固定液的最高使用温度和最低使用温度范围之内 使最难分离的组分有尽可能好的分离前提下，采取适当低的柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度 柱温一般选择在组分平均沸点左右 组分复杂，沸程宽的试样，采用程序升温 气相色谱柱柱温方式 恒温法：在整个分析过程中，色谱柱温保持恒定。 程序升温法：柱温按预定的加热速度，随时间作线性或非线性的增加。 恒定于45℃的分离结果：此时只有5个组分流出色谱柱，低沸点组分分离良好。 恒定于120℃的分离结果：柱温升高，保留时间缩短，低沸点组分峰密集，分离效果不好。 从30℃起，升温速率为5℃/min，低沸点及高沸点各组分都能在各自适应的温度下得到好的分离。 程序升温50~250℃， 8℃/min 恒温150 ℃ 程序升温不仅可以改善分离，而且可以缩短分析时间 气相色谱质谱联用中参数设置 溶剂延迟时间 设置方法： 如果溶剂在目标物之前出峰,那么溶剂延迟时间可以设定在第一个目标物峰出现的前0.5min或1min。 作用： 保护检测器，防止检测器饱和 保护灯丝，延长使用寿命 n-C11 n-C13 n-C15 n-C17 n-C18 气相色谱质谱方法建立过程 仪器方法 目的：定性、定量 质谱参数 色谱参数 样本前处理 二、气相色谱质谱的临床应用 《临床色谱质谱检验技术》 一次检测多种项目，提高检测效率 样本是尿液、唾液等，样本量少，取样方便 高特异性、高选择性、高灵敏度、高分辨率 可同时进行定性和定量分析，是复杂化合物分离和鉴定的重要分析手段，不但可用于未知物的鉴定，还可用于痕量组分测定 气相色谱质谱联用在临床中优势 气相色谱质谱联用在临床中不足 分析易汽化、热稳定物质 前处理一般需要衍生化，操作繁琐 样本基质复杂，内源性干扰多（磷脂，蛋白等） 气相色谱质谱联用技术临床应用要求 临床GC/MS方法验证： 方法的精密度（批内、批间）、准确度、分析测量范围、临床可报告范围、分析灵敏度、基质特异性、干扰试验、携带效应、生物样品稳定性、前处理后样品稳定性、方法参考区间的建立与验证 临床GC/MS方法持续性： 分析方法稳定性（分析物和内标的保留时间、峰形等） 质量控制：室内质控、室间质评、方法期间核查等 目的：确保可获得准确、可靠、可重复的结果，为临床诊断提供合格的数据 尿液有机酸血症 有机酸是氨基酸、脂肪、糖中间代谢过程中所产生的羧基酸，由于某种酶的缺陷导致相关羧基酸及其代谢产物的蓄积，导致有机酸代谢病。有机酸代谢病又称有机酸尿症或有机酸血症，是遗传代谢性疾病中较常见的病种。 患儿临床表现个体差异很大，可以自胎儿期到成年各个时期发病，如不能及时诊断、合理治疗，死亡率很高，存活者常遗留严重神经系统损害。但由于缺乏特异性症状与体征，有机酸代谢病常被漏诊或误诊。 临床应用一：尿液有机酸的检测 氨基酸、有机酸、糖等代谢途径 特异酶基因突变 血酰基肉碱增高 有机酸增高 氨基酸增高 尿中相应有机酸增高 酸中毒 全血细胞减少 高乳酸 高血氨 尿酮体阳性 有机酸血症 呕吐，嗜睡，喂养困难，抽搐，智力、语言、运动发育落后，精神及心理异常，脑磁共振成像异常等 甲基丙二酸血症：甲基丙二酸增高 检测目标化合物：甲基丙二酸 样品前处理方法： 气相色谱质谱联用检测尿有机酸 干尿滤纸片 加水 浸出液 取含有一定肌酐的尿样 酶解 加尿素酶