纤维蛋白原的检测方法及进展[学习].pptVIP

4．浊度法 该法原理是用凝血酶凝固的血浆，纤维蛋白形成增加了浊度，并达到一个与Fg浓度成比例的最后浊度。这种方法灵敏度低，对Fg的最低检测限为0.5 g／L。 * 方法汇编·实用借鉴 5．动态Fg测定法(kinetic fibrinogen assay，KFA) 该法基于纤维蛋白凝块形成的动态反应，通过类似凝血酶将Fg转化为纤维蛋白的作用，测定由于纤维蛋白聚集而引起的浓度增加。该法使用由天然血浆提供的凝血因子，因此非常近似凝血酶和Fg在体内的反应。KFA法不仅可靠准确而且可全自动化，在常规检测中极为简便快速。该法与WHO推荐的参考方法和Claus法均有很好的相关性，且不受肝素和香豆素治疗的影响 * 方法汇编·实用借鉴 6. von Clauss法 这是美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的常规方法，是最常用的可凝固法，美国1975年使用率已占94％ ，此法具有简单、方便、快速、亦可达到一定精密度和准确度的优点 卫生部临床检验中心1999年也VonClauss法为常规测定方法 * 方法汇编·实用借鉴 原理：凝血酶可将可溶性血浆纤维蛋白原转变成不溶性的多倍体纤维素，在高浓度凝血酶及低浓度纤维蛋白原Fg(0．05～0．8 g／L)的条件下．血浆凝固时间由纤维蛋白原浓度决定，在双对数坐标纸上作图，凝血酶凝固时间与纤维蛋白原浓度呈负相关的线性关系 * 方法汇编·实用借鉴 功能法准确特异，是wH0推荐的参考方法(Jacobsson法)和NCCLS推荐的常规方法。但这类方法的缺点是：在2个方面可引起测定误差，一是测定的是纤维蛋白而非Fg。已知Fg变成纤维蛋白时，会切下2个短肽，这样，纤维蛋白实际上比Fg的质量少了约10％。二是纤维蛋白一旦形成，就会吸附一些凝血因子或纤溶因子，这样又会增加所测Fg的量。此外，在获得纤维蛋白和洗涤时比较麻烦且难以做到完全彻底，还容易造成污染。另外还易受肝素等抗凝药物影响 * 方法汇编·实用借鉴 (二)物理化学测定法 这类方法在我国应用最广，可分为盐析法、热沉淀法和电泳法等几种。 * 方法汇编·实用借鉴 1．盐析法 即通过亚硫酸钠、硫酸铵、甘氨酸或氯化钠等盐析后用蛋白质显色剂显色或比浊法测定，常见的方法如双缩脲法，即使用12．5％ 亚硫酸钠溶液将血浆中Fg沉淀分离，然后以双缩脲试剂显色。常用的盐溶液中，除甘氨酸为特异性沉淀外，其余均为非特异性沉淀，而甘氨酸的特异性也仅限于正常血浆；在异常血浆中，甘氨酸的沉淀特异性会受到很大干扰。所以，现在普遍认为这类方法欠准确。 * 方法汇编·实用借鉴 2、热沉淀法 即将血浆加热到56℃，沉淀的Fg 用离心或非免疫学的浊度法测定。这类方法简单快速，适于宽范围的Fg浓度测定，且纤维蛋白降解产物即使处于高浓度也不会干扰此法，但特异性仍较差，一些研究指出该法与Clauss法的结果差异有显著性。 * 方法汇编·实用借鉴 3．电泳法 原理是利用Fg电泳时特征性的迁移率。但Fg是一种相对较少的蛋白成分，故密度测定扫描在一定程度上不准确，而且这种方法太繁琐、费时，不适于常规工作 * 方法汇编·实用借鉴 这类方法都比较简单、快速，尤其适于急诊检验，但缺点是本法的特异性不强。所测的不是有凝固功能的纤维蛋白原，可能包括部分的降解产物和/或其它蛋白。而电泳法又太繁琐，不适于常规工作。 * 方法汇编·实用借鉴 (三)免疫学测定法 这类方法是将纯Fg作为抗原免疫动物，制成多克隆或单克隆抗体，然后用其致敏胶乳或以被动或反向血凝、免疫比浊、单向免疫扩散、火箭电泳、放射免疫及ELISA 等免疫学技术测定Fg * 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 方法汇编·实用借鉴 20XX年X月 整理自网络 李志芳 纤维蛋白原及其检测进展 * 方法汇编·实用借鉴 即凝血因子I，是血浆中含量最高的一种凝血蛋白．是凝血系统的核心蛋白质，它在凝血过程的最后阶段被凝血酶转化成纤维蛋白单体，最终形成不溶性纤维蛋白凝块而发挥血液凝固作用。 纤维蛋白原(flbfinogen，Fg) * 方法汇编·实用借鉴 Fg是分子量为340 KDa的血浆糖蛋白，由肝细胞和巨核细胞合成，约占血浆总蛋白的2 ～3 % 。健康人血浆中浓度为