黑麦着丝粒序列克隆及小麦黑麦易位染色体着丝粒结构分析.pdfVIP

摘 要 黑麦属 (Secalecereale)是小麦的近缘种属,具有许多优于普通小麦的优良性状， 是改良小麦品质、产量和抗病性等性状的重要外源基因供体。比如黑麦1RS臂以 1BL.1RS易位的形式在小麦品种改良中被广泛应用。该易位染色体由黑麦1RS臂和 小麦1BL臂在着丝粒处融合而成。高等真核生物着丝粒确保了真核生物细胞在有丝 分裂和减数分裂过程中染色体的正常分离及遗传信息的稳定传递。着丝粒的结构和 功能在不同物种物种间较为保守，但组成上具有较大差异。它是远缘杂交中外源染 色体在新的遗传背景中稳定存在和遗传的基础，也让染色体间发生重组成为可能。 将为小麦远缘杂交育种及小麦异源易位系的形成及着丝粒融合机制提供理论依据。 Ku 本研究首先从小麦-黑麦杂交后代中，鉴定出小麦-黑麦易位染色体 1BL.1RS 、 1BL.1RLKu 、 1BL.1RSPI428373 、 5BS.5RLKu 、 5BS.2RLKu 、 6DS/6RLKumi200 和 6DL/6RLKumi119，以及小麦-黑麦6RL微小染色体附加系。 在黑麦着丝粒特异重复序列pAWRC.1 的基础上，设计嵌套式特异引物，利用 热不对称交错PCR （TAIL-PCR）对黑麦Kustro 基因组DNA 进行克隆测序，获得了 黑麦着丝粒相关克隆，通过FISH 验证获得黑麦着丝粒特异序列。在此基础上，对 小麦-黑麦易位系易位染色体及6RL微小染色体附加系的着丝粒结构进行研究。获得 了以下结果： 1.利用TAIL-PCR 技术根据pAWRC.1 设计引物，获得了6 条着丝粒特异的重复 3 rycenF2 rycenF3 rycenF5 3 rycenR2 序列，其中有 条 、 和 是黑麦着丝粒特异的，另外 条 、 rycenR3 和rycenR5 是小麦与黑麦着丝粒共有的。 2. 6 W621717 FISH 利用这 条着丝粒特异序列对簇毛麦 进行 分析，发现只有 rycenR3、rycenR5 和rycenF3 在簇毛麦的着丝粒产生信号。 3. GrainGenes BLAST 6 6 利用 中的 工具对这 条序列进行分析，发现这 条序列分 别与数据库中部分黑麦scaffolds序列（S.cereale Lo7scaffolds）比对上，且有较高的 相似度。利用比对到的scaffolds序列在其比对到的序列两侧设计引物以黑麦Kustro 基因组DNA 为模板进行PCR 扩增、克隆测序。经FISH 验证，得到了2 条着丝粒特 A3 rycenR3-1 rycenR3-1 异序列 和 ，其中 是小麦着丝粒特异的序列。 I 4. 8 rycenR5 NCBI 对这 条序列进行比对分析，结果显示：着丝粒序列 与 的核酸 数据库中比对到的序列AB052104.1相似度为92.05%。着丝粒序列A3在RepeatMasker WebServerTriticae(rye barleys wheats) 94% ， ， 中比对到了 的序列，重复序列注释显示 LTR 元件，Gypsy 转座子。这2 条着丝粒特异序列很可能来自Gypsy 类反转录转座 6