峨眉雪胆再生体系的建立及愈伤组织活性成分分析.pdfVIP

摘要 峨眉雪胆 （Hemsleya omeiensis ）是雪胆属多年生植物，其块茎作为中药雪胆 （四 川省中药材标准2010 年版）具有清热解毒、抗菌消炎等多种功效，临床上用于治疗 菌痢、肠炎等多种疾病。由于其分布范围窄、繁殖系数低等问题，急需资源的保护和 开发。本文对峨眉雪胆组织培养进行了初步研究，包括消毒方法的优化、再生体系的 建立和愈伤组织诱导及愈伤组织生长、活性成分 （雪胆甲素、雪胆乙素、竹节参皂苷 Ⅵa 和齐墩果酸）含量的优化培养。为峨眉雪胆的组织再生体系和细胞培养生产活性 成分研究提供理论依据。 峨眉雪胆外植体消毒方法优化：通过考察 75%乙醇和0.1%氯化汞的处理时间对 峨眉雪胆叶片和茎段污染率的影响发现：叶片最佳的处理时间为乙醇处理30 s + 氯 化汞处理5 min；茎段最佳的处理时间为乙醇60 s + 氯化汞10 min。再生体系建立： 以峨眉雪胆的带节茎段为外植体，分别优化了芽诱导培养基和生根培养基。获得的最 佳芽诱导培养基：MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L ；最佳根诱导培养基MS + 1.0 mg/L IBA 。30 天时炼苗存活率可达90% 。愈伤组织诱导和继代培养：以峨眉雪胆的 叶片和茎段为外植体，在不同激素组合的愈伤组织诱导培养基中进行培养，最佳的外 植体和诱导培养基组合是叶片和MS + 2.0 mg/L 6-BA + 1.0 mg/L NAA ，诱导率为100%， 愈伤组织长势好，四种活性成分（雪胆甲素、雪胆乙素、竹节参皂苷Ⅵa 和齐墩果酸） 的总含量最高 （2.03 mg/g 干重）。初代愈伤组织接入不同激素组合、基本培养基、糖 浓度的继代培养基中进行培养，通过比较愈伤组织的鲜重、干重、长势、颜色质地和 活性成分含量，最适合用于愈伤组织继代培养的培养基为MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA + 30 g/L 糖，此时活性成分的总含量为0.89 mg/g 。通过愈伤组织生长曲线 绘制确定愈伤组织最佳的继代周期为21 d 。通过分析诱导子处理对峨眉雪胆愈伤组织 的生长和活性成分的影响发现，最佳诱导子处理是50 μmol/L 硝酸银，该处理下愈伤 组织鲜重和干重降低，但活性成分的总含量为1.85 mg/g，是对照组的1.75 倍。 关键词：峨眉雪胆；组织培养；愈伤组织；活性成分 I Abstract Hemsleya omeiensis is a perennial herb of Hemsleya, which only distributed in Sichuan China, is a traditional Chinese medicinal plant in China (Standards of Chinese medicinal materials of Sichuan province 2010). The tubers of H. omeiensis have many functions such as clearing away heat, detoxifying, antibacterial and anti-inflammatory for treating various diseases such as bacillary dysentery and enteritis. Because of the narrow distribution and low reproduction coefficient, the resources of H. omeiensis need to be protected and developed as soon as possible. In this paper, the research on tissue culture of H. omeiensis was studied, including the optimization of disinfe