基于iTRAQ技术下空心莲子草根响应低钾胁迫的蛋白质组学研究.pdfVIP

摘 要 钾元素与植物生长发育密切相关，是多种农作物的品质指标，在植物细胞内 参与多种生物学路径，具有复杂的分子调控网络。空心莲子草（Alternanthera philoxeroides ）具有较强的适应低钾胁迫的能力，其在蛋白水平对这种胁迫的反 应很大程度上是未知的。本试验研究了低钾胁迫下空心莲子草的生理分子机制， ，并使用同位素标记相对和绝对定量技术（iTRAQ ）研究蛋白质在该植物中的变 化，为空心莲子草低钾胁迫应答的分子机制提供了有价值的见解，为进一步研究 其它植物钾素营养的分子育种提供了重要的依据。主要研究结果如下： 1. 通过对低钾处理不同时期的空心莲子草形态进行观察，发现低钾胁迫 10 天开始，根系部位颜色发黄，处理15 天时根系颜色比对照组较为明显。脯氨酸 和丙二醛的含量随低钾胁迫时间延长而增加。 2. 运用iTRAQ 技术对低钾胁迫的空心莲子草根进行比较蛋白质组研究，得 到375 个差异表达蛋白。生物信息学分析发现差异蛋白主要集中在碳水化合物和 能量代谢、次要代谢、信号传感和转化、压力反应、蛋白质合成、蛋白质降解等 途径。 3. 差异蛋白中鉴定出有 12 个蛋白参与泛素化通路途径，其中 11 个蛋白质 上调。包括泛素激活酶、泛素羧基末端水解酶、26S 蛋白酶调节亚基等。运用 Western Blot 免疫印迹检测赖氨酸泛素化修饰水平，结果表明低钾处理后，小分 子量蛋白的泛素化显著增加。 4. 采用Western Blot 和Real-time PCR 研究随机选取的差异蛋白。Western Blot 印迹结果显示热激蛋白70 （HSP70 ），胞质抗坏血酸过氧化物酶 （APX ）和 Beta-氰丙氨酸合酶（Beta-CAS ）的变化与iTRAQ 结果一致。qRT-PCR 分析随机 选择的12 种差异蛋白对应基因的表达水平，10 个基因表达模式表现出与蛋白质 变化具有相同的趋势，包括抗坏血酸过氧化物酶、热激蛋白 70、Beta-氰基丙氨 酸合成酶等；钙调结合蛋白转录激活因子2 和延伸因子在基因表达和蛋白质表达 之间呈现相反的趋势。 关键词：空心莲子草 ；根；钾；蛋白质组学 I Abstract Potassium is closely related to plant growth and development, and is a quality index of various crops. It participates in a variety of biological pathways in plants and has a complex molecular regulatory network. Alligator weed (Alternanthera philoxeroides ) has a strong ability to adapt to low potassium treatment. Proteomic changes in response to this stress are largely unknown in alligator weed. In this study, we investigated physiological and molecular mechanisms under using isobaric tags for relative and absolute quantitation to characterize proteomelevel changes in this plant. It provides a valuable insights of molecular mechanism underlying low potassium treatment response in alligator weed roots a