医学免疫学：实验1沉淀反应.pptVIP

实验一、沉 淀 反 应  医学微生物学与免疫学实验室规则 实验室安全：防止感染 正确的操作方法 白大衣；勿在实验室饮食；物品尽量放抽屉 实验中意外事故处理 实验结束后洗手 值日生打扫：班长负责安排 （整理、擦桌、扫地、拖地） 一般事项 实验报告：（周三交） 实验报告书写要求 《课程名》、 姓名/年级/班级/日期、 学号 正文： 题目 目的和原理：（原理概括、简要） 材料：（主要材料） 方法：（步骤） 结果：（如实记录，文字、图表等形式） 讨论：（解释和分析、得出结论） （还可以对实验原理、方法、误差等进行探讨、评论和分析，实验失败原因的分析，对实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等） 实验成绩组成 (免/微)总成绩：理论考80% + 20% 操作考核分(5%)：按实验结束后进行的实验考核情况打分。 实验报告分(5%) ：按实验报告的完成情况打分，为所有报告的平均分。 平时及作业分(10%) ：按每次实验的出勤、纪律、值日情况，以及作业本完成情况打分。 （注：作业本也可以复印或自行抄写，期末理论考 结束后由学习委员统一收齐，交任课老师评阅打分） Ag + 相应Ab 抗原抗体反应 (血清学试验) 特异性结合 体内外 已知Ag------检测未知Ab 已知Ab------检测未知Ag 凝集反应 沉淀反应 中和反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术 可溶性Ag + 相应Ab 浓度/比例 温度 pH 电解质 抗原抗体复合物 沉淀反应 （如血清、毒素等） 特异性结合 肉眼可见的沉淀物 一定条件 分类 沉 淀 反 应 环状沉淀反应 絮状反应 琼脂扩散试验 双向扩散 单向扩散 ＋ 电 泳 技 术 火箭免疫电泳 对流免疫电泳 一、双向免疫琼脂扩散 实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体 琼脂内进行扩散，当两者比例合适时， 就出现白色沉淀线（阳性反应）。 沉淀线的形态、清晰度及位置反映抗原或抗 体的特异性和浓度等。利用已知抗原或抗体 检测未知抗体或抗原。 Ab Ag 含离子的琼脂凝胶板 实验目的：待测的标本甲或乙中是否含有AFP AFP：甲胎蛋白 一、双向免疫琼脂扩散 材料： 1％盐水琼脂， 诊断血清（AFP Ab）, 阳性血清（含AFP Ag）， 生理盐水（代替阴性血清） 待检血清甲、乙。 载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。 一、双向免疫琼脂扩散 实验方法： 1、融化1％盐水琼脂； 2、制备半固体琼脂凝胶板：4-5ml/片 3、打孔：梅花孔 4、加样（每孔约10μl）； 5、标记，放湿盒，37℃温箱24h后观察结果。 诊 乙 阴 乙 阳 甲 甲 诊 乙 阴 乙 阳 甲 甲 一、双向免疫琼脂扩散 结果判读： 生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线 阳性血清与诊断血清间形成沉淀线 待检血清、阳性血清与诊断血清间形成沉淀线且融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。 诊 乙 阴 乙 阳 甲 甲 实验结果分析 1 1 Anti-1 二、对流免疫电泳 【实验原理】 蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。 这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。 【实验材料】 1．电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥缓冲液。 2．抗体：诊断血清（AFP抗体）。 3．抗原：阳性血清、待检血清甲乙。 4．1％盐水琼脂。 5．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。 【实验方法】 1．制板 2．打孔：双排孔 3．加样 4．电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压6～10 V/cm板长，电泳约30～60 min。 5．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。 对流免疫电泳实验原理 电渗力：+ → - 电泳力：- → + Ab：电渗力电泳力 Ag：电渗力电泳力 电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷。 甲 诊 正极 NS 诊 乙 诊 甲 诊 阳 诊 乙 诊 负极 Ag Ab Ag A