医学免疫学：溶血空斑试验（PFC测定）.pptVIP

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2020-10-16 发布于安徽
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医学免疫学：溶血空斑试验（PFC测定）.ppt

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溶血空斑试验（PFC测定）(Plaque forming cell assay) 小鼠B细胞溶血空斑形成试验溶血空斑试验是基于抗原抗体反应可活化补体，溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外试验方法，用于检测动物的抗体产生功能的经典的试验。将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液，与一定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC溶解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。实验目的： 1. 掌握PFC试验的基本原理及实验方法； 2. 了解PFC试验的临床意义。实验原理抗原刺激B细胞活化分泌特异性抗体抗原抗体复合物经典途径激活补体系统实验材料小鼠18～22g， 5％、15％SRBC，补体，Hank’s液，解剖器械（剪刀、镊子），空平皿、筛网、组织研磨器、吸管、试管、离心机，载玻片、双面胶、微量加样器、Tip头、棉签、石蜡、石蜡锅、温箱等。【注意事项】? 　1.灌注时防止气泡的出现。? * 实验流程 5％ SRBC 0.4ml腹腔内注射免疫小鼠 4d后颈椎脱臼处死小鼠，取脾脏，放入已加8ml Hank’s液的平皿中，研磨，200目筛网过滤离心：1000r/min×10min 去上清，加2ml Hank’s液制成脾细胞悬液 1.脾细胞悬液的制备实验流程取洁净载玻片两张用双面胶在中间和两端各粘一条，将两张玻片黏在一起即成2个小室 2.制作小室实验流程 3.配制小室灌注液实验管（μl）对照管（μl）脾细胞悬液 100 100 15%SRBC 100 100 补体 100 - Hank’s液 500 600 混匀，分别灌注小室（注满），石蜡封口， 37度，40min. 准备2支试管，按照下表加样：实验组对照组实验组对照组结果：　　实验组出现无数个透明的溶血空斑，而对照组无。溶血空斑边缘不规则，而气泡透亮、边缘规则。气泡空斑 B细胞浆细胞