蛋白酪氨酸磷酸酶选择性抑制剂的研究.pdf

目 录 中 文 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 绪论 1 1.1 引言 1 1.1.1 PTPs 简介 1 1.1.2 PTPs 与疾病的关系3 1.2 SHP-2 抑制剂的研究进展3 1.3 PRL-3 抑制剂的研究进展8 1.4 PTP1B 抑制剂的研究进展 12 1.5 本文的设计思路 18 第二章 PTPs 的表达与纯化 19 2.1 引言 19 2.2 实验部分 19 2.2. 1 主要实验仪器 19 2.2.2 主要实验药品 19 2.2.3 主要实验溶液的配制20 2.2.4 pET28a-△PRL-3 GENE+ E.coli BL21 菌株的构建22 2.2.5 PRL-3 蛋白的表达与纯化22 PRL-3 蛋白表达条件的筛选22 PRL-3 蛋白的纯化23 2.2.6 SHP-2 蛋白的表达与纯化25 2.2.7 PTP1B 和TCPTP 蛋白的表达与纯化26 2.3 结果与讨论26 2.3.1 IPTG 诱导pET28a-△PRL-3 GENE+ E.coli BL21 菌株表达重组蛋白 最佳时间和温度的确定26 2.3.2 PRL-3 蛋白纯化结果27 2.3.3 SHP-2 蛋白纯化结果29 2.3.4 PTP1B 和TCPTP 蛋白纯化结果29 2.4 本章小结30 第三章 席夫碱Ce(III)配合物抑制SHP-2 的研究31 3.1 引言31 3.2 实验部分32 3.2.1 主要实验仪器32 3.2.2 主要实验药品32 3.2.3 主要实验溶液的配制32 3.2.4 Ce(III)配合物1-4 的合成33 3.2.5 Ce(III)配合物1 的晶体结构测定35 3.2.6 Ce(III)配合物1-4 的稳定性研究36 3.2.7 Ce(III)配合物1-4 抑制PTPs 的研究36 3.2.8 Ce(III)配合物3 对SHP-2 抑制类型的研究37 3.2.9 Ce(III)配合物3 对SHP-2 荧光光谱的影响37 3.2.10 细胞存活率和凋亡分析37 3.2.11 蛋白免疫印迹分析38 细胞加药32 细胞的收集和裂解32 蛋白浓度的测定32 电泳和电转32 丽春红染色32 膜的封闭32 抗体的孵育32 曝光32 3.2.12 细胞对Ce(III)配合物3 摄入量的测定40 3.3 结果与讨论40 3.3.1 Ce(III)配合物1 的晶体结构描述40 3.3.2 Ce(III)配合物1-4 在溶液中的稳定性41 3.3.3 Ce(III)配合物1-4 对PTPs 的抑制作用42 3.3.4 Ce(III)配合物3 抑制SHP-2 的动力学分析43 3.3.5 Ce(II