毛细管等速电泳.docx

等速电泳所要求的条件: 1.特殊的电解质系统: 在毛细管等速电泳中，用有效淌度比样品中任何离子的 有效淌度都大，并具有一定缓冲能力的离子作为it旻电 解质(leading electrolyte ),加入到末端(检测端)电解 槽和毛细管中，用有效淌度比样品中任何离子的有效淌 度都小，并具有一定缓冲能力的离子作为尾随电解质 (terminating electrolyte )加入起始端电解槽中.样品加 在前导电解质和尾随电解质之间.系统中要加入对离子, 以满足电中性的要求. 区带电泳和等速电泳使用的电解质溶液的不同 ?在区带电泳中，整个系统都用同一种电解质充 满，这种电解质被称为背景电解质或支持电解 质。它运载电流并有一定的缓冲能力。 ?在等速电泳中，不加入这样的背景电解质。 背景电流要小到足以克服区带电泳效应 在毛细管等速电泳中，由于没有一个背景 电解质支持电流（毛细管等速电泳要求溶 剂的自身电导可以忽略不计） 相连接. ， 各区带互 Inject sample and buffers s Cathode B Cathode Solute Mixture TerminatingBuffer Termin atingBuffer LeadingBuffer 田 Anode Apply electric field . Anode l_ Separated □ r — Sblutes ― 毛细管等速电泳一般用恒流操作模式. 分离开始后，在电压的作用下，各组分由于淌度的 不同被分离. 系统通电后， 样品中迁移速度最大的离子运动最快，但慢于前导 电解质. 迁移速度最小的离子运动最慢,但快于尾随电解质, 具有不同淌度的离子得到分离。 恒稳态时所有区带具有相同的移动速度 瞬聪B cr则各 rL=FA=FB=FC=rT 或： l^l =如耳= Ab^b=Ac^c = At^t 式中，“，有效淌度，Ef电场强度 /zl^l = Zza^a = Ab^b = Ac^c = Zzt^t 由于l〉“a〉b〉c〉“T， 所以有：El《巧《叭《％ t 需鶴噩鞋不同。前导电解质区 毛细管等速电泳的特点 1?自锐化效应: 若某一区带的离子进入前一区带，由于JIJIJ 若某一区带的离子进入前一区带，由于 JIJIJ 电场强度变小而减速，由若进入到下区 带，由于电场强度变大而加速,都退回 到原区带，结果导致各区带形成鲜明的界JIJIJ 到原区带，结果导致各区带形成鲜明的界 JIJIJ 面. 2.浓度特征 对于含有阴离子Al的区带和含有阴离子B2防I护g窥 和 二 Cq,2 在等速电泳中，/==相同值（电流值在各处相同）， 而两区带速度相等： 勺二#2 或，Aa￡1=AB^2 可变为：EJEig 根据欧姆定律，i = e1^=e2a2 （2为电导）， 电导取决与溶质有效淌度和浓度: 心（C出+ CpPp）F 式中，2?电导；F-法拉第常数； G和Cp分别为样品和对离子浓度;“和竹分别为样品和对离子淌度. Ca,i 与 Cq,i 相等，5 每个区带的电导可写为: A= Ca, 1 aF + Cq, i q F 兄2=。B, 2 血尸 + Cq, 2 “Q 尸 Z与Cq, 2相等 =Ca,洱（a+ 氏）， =C B, 2尸（曲 + “Q）， 在等速电泳中，z =常数（不同区带电流相同）， / = EZ/所以 CA / (“a+ “Q)= E c B, 2尸(“B + “Q) 将上式变化，得到: E\ cb,2 = ca 七2 (“a+“q) (Ab+Aq) 因为，EJE亍氏I %,所以, r _厂 “E (Aa+Aq) S,2 _ 匕 A,1 ； C “a(“e+“q) _厂址仪a+他） C B,2 - C A,1 ； C 厶（处+他） 任意区带的组分浓度Cj与前导离子浓度Cl和有关 离子的有效淌度有关.对特定分析，各区带浓度为一 定值，并和前导离子的浓度有关，与样品原始浓度无 关.区带长度反映了进样量的大小，构成定量的根据. 电导取决与有效淌度和浓度： 九= (C.//. + Cp//p)F 品和对离子浓度;“和竹分别为样品和对离子淌度.式中，九?电导率；F-法拉第常数；q和Cp分别为样 品和对离子浓度;“和竹分别为样品和对离子淌度. 由于各区带浓度基本相同，而离子淌 度依次递减，所以电导呈阶梯递减，电阻 呈阶梯上升. 电场强度和温度与区带电阻成正比: ExIR，TccI2R,在恒电流操作的毛细管等速电泳中，电 阻呈阶梯上升? E，T也呈阶梯上升. 由于等速电泳具有浓缩痕量组分的作用，常 和区带电泳耦合，用于区带电泳的浓缩进样? 对接式耦合 套接式耦合 单毛细管ITP - CZE 对接式耦合 A B T !l5 !l 5—二 2—_ 1 1TP￡